A-vitamiin veres

A-vitamiini (retinooli) kontsentratsiooni võrdlusväärtused (norm) vereseerumis: 1-6-aastastel lastel - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12-aastastel - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19-aastastel - 0,91-2,51 μmol/l; täiskasvanutel - 1,05-2,09 μmol/l.

A-vitamiin on rasvlahustuv vitamiin ja esineb kahes vormis: A-vitamiin ise ehk retinool (leidub ainult loomsetes saadustes) ja provitamiin A ehk karoteen (saadud loomsetest ja taimsetest saadustest), mis seedetrakti seintes muundub retinooliks. Ligikaudu 50–90% toidus saadavast retinoolist imendub peensooles ja transporditakse külomikroniga seotud kompleksis maksa, kus see säilitatakse retinoolipalmitaadina. Vajadusel vabaneb see vereringesse retinooli ja A-vitamiini siduva valgu kompleksina. Vereseerumis seondub A-vitamiini siduva valgu ja retinooli kompleks transtüretiiniga. Vereseerumist omastavad retinooli sihtrakud, näiteks võrkkesta ja epiteeli fotoretseptorid.

Kui organism saab A-vitamiini vajadusest suuremas koguses (180–430 mcg retinooli päevas, olenevalt vanusest, soost ja füsioloogilisest seisundist), ladestub selle liig maksas, moodustades selle vitamiini depoo. Kui retinooli tarbimine toiduga väheneb, vabanevad selle varud maksast vereringesse, hoides retinooli kontsentratsiooni vereseerumis normaalsel tasemel (üle 0,7 μmol/l). Teised A-vitamiini bioloogiliselt aktiivsed vormid (retinool ja retinoehape) esinevad veres väga madalates kontsentratsioonides (alla 0,35 μmol/l); retinooli estrid moodustavad ligikaudu 5% A-vitamiini koguhulgast (0,1–0,17 μmol/l).

A-vitamiinil on oluline roll oksüdatsiooni-redutseerimise protsessides. Retinool soodustab glükogeeni moodustumist maksas ja lihastes, aitab suurendada kolesterooli taset veres ning osaleb steroid- ja suguhormoonide sünteesis. See on vajalik skeleti kasvuks ja moodustumiseks, rodopsiini resünteesiks ning soodustab ka limaskestade ja naha epiteeli normaalset toimimist, ennetades selle metaplaasiat, hüperkeratoosi ja liigset koorimist. A-vitamiin aitab tugevdada juukseid, hambaid ja igemeid. Viimastel aastatel on näidatud A-vitamiini mitmekesist rolli vähi ennetamisel ja immuunsuse reguleerimisel (see on vajalik fagotsütoosi lõpuleviimiseks, suurendab Ig sünteesi, stimuleerib T-tapjate moodustumist, stimuleerib II tüüpi T-abistajaid jne). A-vitamiin on aktiivne antioksüdant, mis toimib peamiselt E-vitamiini juuresolekul; see kaitseb C-vitamiini oksüdatsiooni eest. A-vitamiini puudust peetakse pahaloomuliste kasvajate riskiteguriks. Eksperimentaalsed uuringud on näidanud, et A-vitamiini sisalduse suurendamine toidus pikendab keskmist eluiga 17,5%. Tsink on A-vitamiini metabolismi oluline kofaktor (vajalik A-vitamiini siduva valgu sünteesiks).

Täiskasvanute (20–50-aastased) keskmine päevane retinoolivajadus on 1,2 mg (4000 RÜ, 1 RÜ võrdub 0,3 mcg retinooliga), rasedatel naistel – 1,5 mg (5000 RÜ), imetavatel naistel – 1,8 mg (6000 RÜ) ja üle 60-aastastel inimestel – 2,5 mg (10 000 RÜ). Vähemalt kolmandik retinooli päevasest vajadusest peaks organism saama valmis kujul; ülejäänu saab katta karotenoidide tarbimisega, millest organismis retinool moodustub. Arvestada tuleb sellega, et toiduainetes hävib kuumtöötlemise käigus umbes 30% retinoolist. Retinooli aktiivsus on 2 korda suurem kui karoteenil, lisaks imendub soolestikus viimasest vaid 30–40%. Seetõttu arvatakse toitumise hindamisel, et 1 mg retinooli võrdub ligikaudu 6 mg karotenoididega.

Retinooli (A-vitamiini) ja karotenoidide määramine vereseerumis Bessey meetodi järgi, mida on modifitseerinud L. Anisimova

Meetodi põhimõte

A-vitamiini ja karotenoidide määramine põhineb nende hüdrolüüsil aluselises alkoholilahuses, millele järgneb ekstraheerimine orgaaniliste lahustite seguga.

Reaktiivid

• 11 M kaaliumhüdroksiidi (KOH) lahus.
• 96% etüülalkohol.
• 1 M kaaliumhüdroksiidi (KOH) lahus 96% etüülalkoholis: 1 mahuosa 11 M KOH lahust segatakse 10 mahuosa 96% etüülalkoholiga. Reaktiiv valmistatakse ette uuringu päeval. Kui segamise ajal toimub värvumine, tuleks alkohol enne kasutamist destilleerimise teel puhastada.
• Ksüleen, keemiliselt puhas
• Oktaan, keemiliselt puhas
• Ksüleeni-oktaani segu: valmistatakse võrdsetes kogustes ksüleeni ja oktaani segamisel.

Uuringud viiakse läbi spektrofotomeetri abil.

A-vitamiini määramise protsess

Sõrmest võetud veri (umbes 1 ml) pannakse tsentrifuugituubi ja asetatakse 20–30 minutiks sooja veega (temperatuur 40–45 °C) klaastopsi. Seerumi eraldamiseks tõmmatakse verehüüve ettevaatlikult õhukese klaaspulgaga mööda tuubi seinte serva ja tsentrifuugitakse kiirusel 3000 p/min 10 minutit.

Kogutakse 0,12 ml seerumit ja viiakse aglutinatsioonitorusse, kuhu lisatakse 0,12 ml 1 M kaaliumhüdroksiidi alkoholilahust. Sisu loksutatakse hoolikalt.

Proovidega katseklaasid asetatakse hüdrolüüsi läbiviimiseks 20 minutiks 60 °C veevanni.

Proovid jahutatakse, neile lisatakse 0,12 ml ksüleeni-oktaani segu ja loksutatakse jõuliselt 10–15 sekundit. Seejärel jahutatakse uuesti ja tsentrifuugitakse.

A-vitamiini ja karotenoide sisaldav ülemine kiht eemaldatakse ettevaatlikult kummist pirniga Pasteuri pipeti abil ja kantakse mikroküvettidesse.

Proove spektrofotomeetritakse lainepikkusel 328 nm A-vitamiini määramiseks ja lainepikkusel 460 nm karotenoidide määramiseks.

Pärast spektrofotomeetriat kiiritatakse proove A-vitamiini hävitamiseks ultraviolettkiirgusega. Selleks paigaldatakse mikroküvetidest 15–20 cm kaugusele kvartslamp (bakteritsiidne lamp), nii et vedelikuga täidetud küveti osa saaks kiirguse kätte; kiiritusaeg on 45–60 minutit.

Proove spektrofotomeetritakse uuesti lainepikkusel 328 nm. A-vitamiini sisaldus määratakse ekstinktsiooniväärtuste (optilise tiheduse) erinevuse abil, võttes arvesse Bessey poolt A-vitamiini jaoks arvutatud koefitsienti (tegurit) 637.

Arvutus tehakse järgmise valemi järgi:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Kus X on A-vitamiini sisaldus, μg/dl; 637 on Bessey arvutatud A-vitamiini määramise koefitsient; E328(1) on lahuse optiline tihedus enne kiiritamist; E328(2) on lahuse optiline tihedus pärast kiiritamist.

A-vitamiini kontsentratsiooni µg/dl-st µmol/l-ks teisendamise koefitsient on 0,035.

Karotenoidide sisaldus arvutatakse järgmise valemi abil:

X = 480-E480,

Kus X on karotenoidide sisaldus, μg/dl; 480 on Bessey arvutatud koefitsient karotenoidide määramiseks; E480 on testlahuse optiline tihedus.

Märkus

Bessey sõnul võib uuringute läbiviimisel kasutada suuremat või väiksemat seerumi mahtu, kuid selle suhe alkoholilahuse mahuga peab olema konstantne ksüleeni-oktaani segu mahu (koguse) muutuste korral.

A-vitamiini normaalne sisaldus vereseerumis on: vastsündinutel ja imikutel – 160–270 μg/l; täiskasvanutel – 1,05–2,45 μmol/l (300–700 μg/l). Karotenoidide sisaldus täiskasvanute vereseerumis on 800–2300 μg/l.