Triikumõõtme hematopoeetilised tüvirakud

Ilmselt erinevate proliferatiivsete ja diferentseerumist vereloome tüvirakkude potentsi eripära tõttu nende ontogenetic arengule, sest protsessis ontogeneesis inimese muuda isegi lokaliseerimine peamisi vereloomet. Loote munarakkude hematopoeetilised eellasrakud on pühendunud erütropoeetiliste rakuliinide moodustumisele. Pärast primaarse GSK migratsiooni maksa ja põrnani nende elundite mikrokeskkonnas suureneb komisjoni liinide spekter. Eelkõige omandavad hematopoeetilised tüvirakud võimet genereerida lümfoidseid liike. Sünnitusjärgsel perioodil jõuavad hematopoeetilised prekursorrakud lõpliku lokaliseerimise tsooni ja luuüdisse koloniseerivad. Loote arengu käigus looteveres leidub märkimisväärsel hulgal varre hemopoeetilisi rakke. Näiteks raseduse 13. Nädala jooksul jõuab HSC tase 18% -ni mononukleaarsetest vererakkudest. Tulevikus on nende sisu järk-järgult vähenenud, kuid isegi enne sünnitust on nabaväädivere hulk HSC-s vähene võrreldes nende arvuga luuüdis.

Vastavalt klassikalise ideid, füüsiline muutus lokaliseerimine vereloomet embrüonaalse arengu käigus imetajatel toimub migratsiooni ja rakendamine uue mikrokeskkonna pluripotentsed vereloome tüvirakkude arvu - alates rebukotti maksa, põrna ja luuüdi. Kuna algstaadiumis embrüonaalse arengu kohta vereloomekudedega sisaldab suure hulga tüvirakke, mis väheneb tiinust, kõige paljulubav saamise vereloome tüvirakkude arvu peetakse hematopoeetiliseks Iootemaksa koe isoleeriti abortnogo materjali 5-8 rasedusnädalast.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Vereloome tüvirakkude päritolu

See, et erütrotsüütide embrüonaalne moodustumine pärineb munakollase vere saartelt, on kahtlemata. Siiski on in vitro diferentseerumise potentsiaali vereloome x rebukotis rakud on väga piiratud (nad diferentseeruvad valdavalt erütrotsüüdid). Tuleb märkida, et siirdamine Vereloome tüvirakkude rebukotti ei ole võimalik taastada vereloomet pikka aega. Selgus, et need rakud ei ole täiskasvanu organismi GSK prekursorid. Tõsi GSK ilmuvad varem, 3-5 nädalat loote arengu tsoonis moodustumise mao koest ja veresoonte epiteelis (paraaortic splanchnopleura, P-SP) ja asemele järjehoidjaid aordis sugunäärmete ja esmaste neeru - valdkonnas või nii mesonephros AGM-ala. On näidatud, et rakud AGM-piirkonda kuuluvad mitte ainult allikas HSC, kuid endoteelirakkude veresoonte ja osteoklastide, protsessid luu moodustumise. On 6 gestatsiooninädalat alguses vereloome eellasrakkude AGM-linnaosa reisi maksa, mis on peamine vereloome loote enne sündi.

Kuna see punkt on äärmiselt oluline nii siirdamise probleem päritolu HSC embrüonaalse inimese väärib üksikasjalikumat esitlus. Klassikaline idee, et vereloome tüvirakkude imetajate ja lindude saadud adneksaali allikas, mis põhineb teadustöö Metcalf ja Moore, kes esimesena kasutatud kloonimismeetoditel GSK ja nende järeltulijad, isoleeritud rebukotti. Tulemused oma töö aluseks migratsiooni teooria, mille kohaselt GSK esiteks tekkinud rebukotti järjepidevalt hõivata mööduv ja lõplikku vereloome organite moodustamise protsessi nende mikrokeskkonda. Nii määrati kindlaks, et GSK põlvnemine, mis oli algselt kollased, on rakulise baasina lõplikuks hematopoeesiks.

Vereloome rakkudes rebukotti on kõige alguses vereloome rakke. Nende fenotüüpi kirjeldatakse valemiga AA4.1 + CD34 + c-kit +. Erinevalt HSC küps luuüdi nad ei väljenda Sca-1 antigeenide ja MHC molekuliga. Tundub, et välimus marker antigeenide pinnamembraanidele GSK rebukotis kultuuristades vastab nende diferentseerumise embrüonaalse arengu käigus moodustumisega toime rida vereloomet: väheneb ekspressioonitaset CD34 antigeeni ja Thy-1 suurendab ekspressiooni CD38 ja CD45RA, ilmuvad HLA-DR molekulidega. Järgneva indutseeritud tsütokiinide ja kasvufaktorite, in vitro ekspressiooni spetsialiseerumine algab spetsiifiliste antigeenide vereloome rakkudes eriti rakuliinis. Kuid uuringu tulemused embrüonaalsete vereloomet esindajad kolme klassi selgroogsete (kahepaiksed, linnud ja imetajad), ja eelkõige analüüsi päritolu HSC vastutavad lõplike vereloomet sünnitusjärgse ontogenees, vastupidiselt klassikalise ideid. Selgus, et esindatud kõik eespool nimetatud klassidesse embrüogeneesis moodustatud kaks sõltumatut alad, mis on tekkinud GSK. Ekstraembrüonaalsetest "klassikalise" piirkonnas esindatud rebukoti või selle analoogid, kuigi hiljuti tuvastatud intraembrionalnaya HSC lokaliseerimine tsoon sisaldab paraaortaalses mesenhüümi ja AGM-ala. Täna võib väita, et kahepaiksed ja linnud lõplikku HSC saadud intraembrionalnyh allikatest, arvestades imetajatel ja inimesel GSK osa rebukotti lõplikud vereloomet on ikka võimatu täielikult kõrvaldada.

Embrüonaalsete vereloomet rebukotti on sisuliselt esmase erütropoeesi mida iseloomustatakse säilimist tuuma kõigil erütrotsüütide küpsemine ja tüüp lootehemoglobiini sünteesi. Uuemate andmete kohaselt lõpeb primaarse erütropoeesi laine embrüonaalse arengu kaheksandal päeval munakottis. Sellele järgneb periood kogunemine lõplikku erütroidsete eellasrakkude - BFU-E, mis on moodustatud ainult rebukotti ja esimene ilmus 9. Päeva tiinust. Embrüogeneesi järgmine etapp moodustab juba lõplikud erütroidi eellasrakud - CFU-E, samuti (!) Nuumrakud ja CFU-GM. See põhineb olemasolu sellest seisukohast, et lõplik eellasrakud tekkida rebukotti, rändavad läbi vereringesse, koguneda maksas ja kiiresti algatada esimese etapi intraembrionalnogo vereloomet. Vastavalt nimetatud esinduse, rebukotti võib pidada, ühelt poolt, kui koht esmase erütropoeesi ja teine - esimese allikas lõplikku vereloome tüvirakke embrüonaalses arengus.

On näidatud, et kolooniatmoodustavat rakkude kõrgproliferatiivset potentsiaali võib eraldada rebukotti on juba 8. Päeval tiinus, st ammu enne sulgemist veresoonkonnale embrüo ja rebukoti. Lisaks on saadud rebukotti koos kõrgproliferatiivset toimet in vitro kolooniaid moodustavate rakkude suurus ja raku kompositsioon, mis ei erine vastava parameetrid kultuuri kasvu luuüdi tüvirakke. Samal ajal, kusjuures kolooniat retransplanteerimine rebukotis rakkude kõrgproliferatiivset potentsiaali moodustatud oluliselt rohkem kolooniaid moodustavate rakkude ja tütar multipotent eellasrakkude kui luuüdi vereloome rakkudes.

Lõppjäreldus rollist vereloome tüvirakkude rebukotti lõpliku vereloomet võib anda tulemusi, mille autorid on saadud joont endoteelirakkude rebukotti (G166), mis efektiivselt toetas tema proliferatsiooni fenotüübilise ja funktsionaalsed omadused HSC (AA4.1 + WGA +, madala tihedusega ja nõrkad liimained). Sisu hiljemalt nende kasvatamisel feeder kiht rakke S166 8 päeva suurenenud rohkem kui 100 korda. Segatud kasvanud kolooniad aluskiht on S166 rakuliin, tuvastati makrofaagid, granulotsüüdid, Megakarüotsüütides, monotsüütide ja blastrakkudena ja eellasrakkude B- ja T-lümfotsüütide. Rebukoti rakud, kasvatades alamkihi endoteelirakkude on võime end ise taastootma ja hoitakse eksperimendid autorite kolme lõigud. Taastumine nende kaudu vereloomet täiskasvanud hiirte raske kombineeritud immuunpuudulikkuse (SCID) kaasas moodustumist kõik leukotsüütide liiki, samuti T ja B-lümfotsüüdid. Kuid autorid nende teadusuuringute abil rakkudes rebukotti 10 päeva embrüo, millest rakuvälist ja intraembrionalnye veresoonte süsteem on juba suletud, mis ei välista, et rakkude hulgas rebukoti GSK intraembrionalnogo päritolu.

Samal ajal, analüüs diferentseerumise potentsiaali vereloome rakkudes algstaadiumis enne Kombineerides valitud veresoonkonnale embrüo ja rebukotti (8-8,5 päeva tiinust) paljastasid eellased T- ja B-rakkude rebukotti, kuid mitte kehas embrüo . In vitro meetod kaheetapilise kultiveerimissüsteemi monokihil epiteeli ja subepiteeli rakud harknääre mononukleaarrakud diferentseerunud rebukotti pre-T ja küps T-lümfotsüüdid. Samadel kultiveerimisel, kuid monokihil stroomarakke maksa ja luuüdi ühetuumalised rakud rebukotti olid diferentseerunud pre-B-rakud ja küpse IglVT-B-lümfotsüüdid.

Nende tulemused uuringud viitavad võimalusele areng rakud immuunsüsteemi lootevälisest rebukotis koe moodustumist primaarse T- ja B-rakuliine sõltuvad tegurid hematopoeetiliseks stromaalsete mikrokeskkonda embrüonaalsete organitesse.

Teised autorid märkisid ka, et rebukoti rakkude mõjususi sisaldab lümfoidne diferentseerumine ja moodustunud lümfotsüüdid ei erine antigeense omadused küpsetes loomadel. On leitud, et rakud rebukotti 8-9-päevase embrüo saab taastada tüümuse lümfopoeesi in atimotsitarnom tekkimist küpse CD3 + CD4 + - ja CD8 + SDZ + lümfotsüütides omades kaunistatud repertuaaris T-raku retseptorid. Seega harknääre võib asustatud rakkude adneksaali päritolu, kuid see on võimatu välistada võimalust rände harknäärmesse eellasrakud T lümfotsüüdid intraembrionalnyh lümfopoeesi allikatest.

Kuid siirdamisest rebukotti Vereloomerakkude viiakse kiiritatud täiskasvanud saajad ei ole alati lõpule taastamispoliitika kaua laastatud tsoonide vereloomekudedega lokaliseerimine, et in vitro rakkude rebukotti moodustada põrna kolooniad palju väiksem kui rakud AGM-ala. Mõningatel juhtudel, via rebukotti rakud 9-päevase embrüo on veel võimalik saavutada pikaajaline (kuni 6 kuud) taastamispoliitika kohta vereloomekudedega kiiritati saajatele. Autorid usuvad, et rakkudes rebukotti fenotüübi CD34 + c-kit + nende võime repopulate laastas vereloome, mitte ainult ei erine AGM-piirkonnas, vaid ka tõhusamalt taastada vereloomet, nagu rebukotti need sisaldavad ligi 37 korda rohkem .

Tuleb märkida, et katsetes hematopoeetiliseks rakkudes rebukotti SM-ga antigeenide GSK (c-kit + ja / või CD34 + ja CD38 +), mis võeti kasutusele otse maksa või kõhu veeni järglaskonda emased hiired süste saanud busulfaanil kuni 18. Päeval rasedus. Nendes vastsündinud loomade enda müelopoeesis olnud järsult masendunud tõttu kõrvaldamiseks vereloome tüvirakkude põhjustatud busulfaanil. Pärast siirdamist HSC of rebukotti kuud ja perifeerses veres saajate eristab vereliblede sisaldas doonori marker - glitserofasfatdegidrogenazu. On leitud, et rebukotti GSK vähendatud sisaldusel lümfoidrakku, müeloidne ja erütrodide liini verd, tüümuses, põrnas ja luuüdis, kusjuures tase kimäärsus oli kõrgem puhul intrahepaatilisi mitte intravenoosse rebukotis rakkudes. Autorid näitavad, et HSC kohta rebukotti embrüote algstaadiumis (kuni 10 päeva) edukale lahendamisele vereloome organite täiskasvanud saajad vajavad esialgse koostöös vereloome mikrokeskkonda maksa. On võimalik, et embrüogeneesis on unikaalne arengujärgus, kui rakud rebukotti, rändavad peamiselt maksas ja siis omandada võime koloniseerida stroomas vereloome täiskasvanud saajad.

Seoses sellega tuleb märkida, et kimäärsus rakkude immuunsüsteemi täheldatakse sageli pärast luuüdi siirdamist rakkude kiiritati saajate suguküpset - in vererakke Doonori viimase fenotüüpe piisavalt suures koguses leidub seas B- ja T-lümfotsüüdid ja granulotsüütide saaja kestab vähemalt 6 kuud.

Morfoloogilised meetodeid vereloome rakkude imetajatel esimene avastatud 7. Päeval embrüonaalse arengu ja esitab vereloome saartel laevad rebukotti. Kuid loomulik hematopoeetiliseks diferentseerimist rebukotti piirdub esmase erütrotsüüdid säilitades südamik ja sünteesimiseks lootehemoglobiini. Kuid traditsiooniliselt arvati, et rebukoti on ainus allikas HSC rändavad vereloome on arenevale lootele ja anda lõplikke vereloomet täiskasvanud loomadel, kuna välimus HSC kehas on loode sulgemise veresoonkonna embrüo ja rebukoti. Selle tõestuseks seisukohast andmetel, et in vitro kloonimine rakud rebukotti tekitada granulotsüüdid ja makrofaagid, et in vivo - põrna kolooniad. Siis siirdamise ajal eksperimentides leiti, et hematopoeetiliseks rakkudes rebukotti, mis rebukotti on võimalik eristada ainult esmasteks punaliblede mikrokeskkonda maksast vastsündinud ja täiskasvanud SCID-hiired Devastated harknääre või stroomarakkude feeder saada võime repopulate hematopoeetiliseks elundites taastamiseni kõik hemopoeesi read isegi täiskasvanud retsipient-loomadel. Põhimõtteliselt võib seda seostada neid kategooriasse tõsi GSK - nagu raku toimimist ja sünnitusjärgsel perioodil. Eeldatakse, et rebukoti koos AGM piirkonna allikas HSC lõplike vereloomet imetajad on aga endiselt ebaselge nende panuse vereloomesüsteemi. Ma ei mõista bioloogilise tähenduse ja olemasolu alguses embrüogeneesis imetajate kaks vereloome sarnaste funktsioonidega.

Nendele küsimustele vastuste otsimine jätkub. In vivo õnnestunud tõestada juuresolekul rebukotis embrüote 8-8,5-päevase raku lümfopoeesi vähendamisel subletaalselt kiiritatud SCID-hiired, kellel on raske puudust T- ja B-lümfotsüüdid. Kollaskoti hematopoeetilised rakud süstiti nii intraperitoneaalselt kui otse põrna ja maksa koesse. Pärast 16-nädalast saajate eristab TCR / CD34 \ CD4 + ja CD8 + T-lümfotsüütide ja B-220 + IgM + B-rakud märgistati antrhgenami doonori MHC. Autorid ei leidnud organismis tüvirakkude 8-8,5-päevaseid embrüode, mis on võimelised immuunsüsteemi taastama.

Rebukotis Vereloomerakkude omavad kõrgproliferatiivset potentsiaali ja suudavad pikaajalise füüsilisest paljunemist in vitro. Mõned autorid on tuvastanud nendes rakkudes alusena pikaajalise HSC (umbes 7 kuud) genereerimist erütroidsete eellasrakkude erineb luuüdi eellasrakke erütroidsete line passaažida pikema kestusega, suured kolooniad, suurenenud tundlikkus kasvufaktoreid ja pikemaajalisem vohamist. Lisaks sobivates kultiveerimise rebukotis rakkudele in vitro tingimustes moodustuvad ja eellasrakkude lümfistruktuure seerias.

Need andmed viitavad sellele üldine allikas rebukotti GSK, kusjuures vähem pühendunud ja seetõttu on suur proliferatiivsete potentsiaali kui luuüdi tüvirakke. Kuid vaatamata sellele, et rebukotti sisaldab pluripotentsed vereloome rakkude pikaajaline toetab erinevate liinide vereloome diferentseerumist in vitro, mille ainus kriteerium kasulikkust Gcw on nende võime repopulate pikenenud hematopoeetiliseks elundite saaja vereloome rakud, mis on geneetiliselt defitsiitse või kahjustatud. Seega on põhiküsimus, kas pluripotentsed vereloome rakkudes rebukoti rännata ja koloniseerida vereloome organite ja tselesoorbrazno vaadatakse kuulus töö, mis näitas nende võimet repopulate vereloome seksuaalselt küps loomade tekkega suuremate vereloome read. Embrüote linnud 70-ndate tuvastati intraembrionalnye allikatest lõplikku HSC, mis oli juba kahtluse väljakujunenud mõisted päritolu kohta adneksaali GSK, sealhulgas esindajad teistesse klassidesse selgroogsetel. Viimastel aastatel oli publikatsioonide olemasolu imetajad ja inimesed sarnased intraembrionalnyh saidid sisaldavad GSK.

Taas märgime, et põhilisi teadmisi selles valdkonnas on väga oluline praktiline siirdamist, mitte ainult aidata määratleda eelistatud HSC allikas, vaid ka luua eripära interaktsiooni esmane vereloome rakud geneetiliselt võõrorganismides. On teada, et manustamine inimese vereloome tüvirakkude arvu loote lambad maksa organogeneesi embrüost etapi tulemusena saadakse kimäärsed loomad, vere ja luuüdi stabiilselt määrati 3-5% inimese vereloomerakkudes. Sel juhul inimese HSC ei muuda oma karüotüüpi, säilitades samas kõrge leviku ja võime eristada. Lisaks siirdatud ksenogeensel HSC ei läheks vastuollu immuunsüsteemi ja fagotsüütrakud peremeesorganismi ega ole muundatakse kasvajarakke, mis olid aluseks intensiivne areng meetodid emakasisene korrektsioon pärilike geneetiliste haiguste lehe sotsiaalnõukogud või HSC transfekteeritud defitsiitse geene.

Kuid millises etapis on embrüogeneesi korral parem korrigeerida? Rakkudes esmakordselt, määrati vereloomet imetajatel ilmu kohe pärast implantatsiooni (päeval 6 rasedusnädalal), mil morfoloogilised tunnused vereloome diferentseerumise ja eeldatavad hematopoeetiliseks elundid ei ole veel kättesaadavad. Selles etapis dispergeeritud hiire embrüo rakud võivad repopulate hematopoeetiliseks elundite kiiritati saajate moodustamaks erütrotsüüdid ja lümfotsüüdid, erineb peremeesrakke või hemoglobiini type vastavalt glitserofosfatizomerazy ja täiendavaid kromosomaalse marker (Tb) Doonori rakkudes. Imetajatel nagu linnud, koos rebukoti sulgemise kogu veresoonkonnas otse keha embrüo paraaortaalsetesse splanhnoplevre ilmuvad vereloome rakke. Alates AGM-eraldatud ala Vereloomerakkude AA4.1 + fenotüüpi, mis identifitseeriti kui multipotent Vereloomerakkude moodustav T- ja B-lümfotsüüdid, granulotsüüdid, Megakarüotsüütides ja makrofaagid. Fenotüüpiliselt need multipotent eellasrakud on väga lähedased luuüdi HSC täiskasvanud loomadel (CD34 + c-kit +). Arv multipotent AA4.1 + rakkude kõigi AGM-rakkude ala on väike - nad ei ole rohkem kui 1/12 osa sellest.

Inimese embrüos leiti ka homoloogset loomade AGM piirkonda, mis sisaldas HSC-d sisaldavat intraembrioonset piirkonda. Lisaks sellele on inimese embrüo kehas enam kui 80% suure potentsiaalse potentsiaaliga multipotentsete rakkudega, kuigi sellised rakud asuvad munakollas. Nende lokaliseerimise üksikasjalik analüüs näitas, et sadu selliseid rakke kogutakse kokku kompaktsetesse rühmadesse, mis paiknevad dorsaalse aordi ventraalse seina lähedal endoteelil. Fenotüüpiliselt on nad CD34CD45 + Lin rakud. Vastupidi, munarakk, nagu ka teised embrüo (maksa, luuüdi) hematopoeetilised elundid, on sellised rakud üksikud.

Järelikult inimembrüo AGM-kond sisaldab klastrid Vereloomerakkude mis on tihedalt seotud ventraalne dorsaalne aordis endoteeli. See kontakt on võimalik jälgida ja immunokeemilisi tasandil - ja klastrid Vereloomerakkude ja endoteeli rakud, mis ekspresseerivad vaskulaarse endoteeli kasvufaktori, Flt3 ligand ja nende retseptorite FLK-1 ja STK-1, samuti transkriptsioonifaktori leukeemia tüvirakke. Üldkoosolekust-ala Mesenhümaalsed derivaadid esindatud tihe tyazhem ümardatud rakud asuvad piki selja aordi ja Tenastsiini C - glükoproteiini põhiaine osaleb aktiivselt protsesside rakk-rakk interaktsioone ja migratsiooni.

Multipotentseid tüvirakud AGM-ringkonnas pärast siirdamist kiiresti taastada vereloomet täiskasvanud hiirtel ja eksponeeriti kaua (kuni 8 kuud) luua tõhus vereloomet. Selliste omadustega rakkude munakollas ei leitud autorid. Tulemused selles uuringus kinnitavad ka muud tööd, mis näitas, et varases arengujärgus embrüote (10,5 päeva) AGM piirkonnas on ainus allikas rakud, mis vastavad määratlusele Gcw, müeloidse ja lümfoidse taastada vereloomet täiskasvanud kiiritatud saajad.

Alates AGM-eraldatud ala strooma line AGM-S3, mis toetavad põlvkonna rakukultuuris CFU-GM pühendunud eellasrakkude BFU-E, CFU-E ja CFU segatüüpi. Viimane sisu kasvatatakse AGM-S3 rakkude feeder-alamkihil 10 kuni 80 korda. Seetõttu mikrokeskkonna AGM-piirkonnas käesoleva stroomarakke, tõhusalt toetada verd, nii et ta AGM-ala võib olla embrüo vereloome - lõplik allikas HSC, mis on GSK moodustavad vereloomekudedega täiskasvanu loom.

Täpsem immunofenotipirovanie rakulise koostise AGM-piirkonna näitas, et see elada mitte ainult multipotent Vereloomerakkude, aga ka rakkude pühendunud müeloidse ja lümfoidse (T ja B-lümfotsüüdid) diferentseerumist. Samas, kui molekulaarne analüüs üksikute CD34 + c-kit + rakke AGM-regiooni kasutades polümeraasi ahelreaktsiooni näitas aktiveerides ainult beeta-globiini ja müeloperoksidaas kuid mitte lümfoidse kodeerivate geenide süntees CD34, Thy-1 ja 15. Osaline aktiveerimise tüvega spetsiifilisi geene tüüpiline HSC ja eellasrakkude genereerimise varajased ontogeneetilised etapid. Arvestades, et number kommiti- Rowan eellaste AGM-ala 10-päevase embrüo 2-3 suurusjärku madalam kui maksas, võib väita, et 10. Päeval embrüonaalsete vereloomet AGM on algamas, samas peamiselt hematopoeetilised jooned on sellel perioodil juba kasutusel.

Tõepoolest, erinevalt varem (9-11 päeva) vereloome tüvirakud rebukotti ja pindala AGM, mis repopulating hematopoeetiliseks mikrokeskkonda vastsündinud, kuid mitte täiskasvanud vereloome eellasrakkude 12-17 päeva Iootemaksa ei nõua varase postnataalse mikrokeskkonna ja vereloome elundite hõivata täiskasvanud loom ei ole hullem kui vastsündinud. HSC siirdamise järel Iootemaksa täiskasvanud vereloomet kiiritatud retsipienthiirte oli polüklonaalse iseloomuga. Lisaks kasutatakse märgistatud kolooniad on näidatud, et operatsiooni väljakujunenud kloonid olid täiesti kuuletub klonaalsest üksteise avastatud täiskasvanu luuüdist. Seetõttu GSK Iootemaksa tähistatud nii palju õrn tingimused ilma prestimulyatsii eksogeense tsütokiinide juba põhitunnused täiskasvanud HSC ole vajalik siis varase embrüonaalse mikrokeskkond meie seisundi sügavale ülejäänud pärast siirdamist ja mobiliseeritud klonoobrazovanie järjestikku vastavalt mudeli klonaalsest järjest.

Ilmselgelt peaksime kloonipärimuse fenomeni kohta veidi täpsemalt elama. Erütropoeesi viiakse vereloome tüvirakkude arvu koos kõrgproliferatiivset potentsiaali ja võimet diferentseeruda kõigi rakukultuuride pühendunud eellasrakkude vererakke. Normaalse vereloomet osatähtsus enamus vereloome tüvirakkude arvu on puhkeseisundis ja mobiliseeriti proliferatsiooni ja diferentseerumist järjestikku moodustades järjestikuseid kloonid. Seda protsessi nimetatakse kloonide järjestuseks. Kroonilise pärilikkuse uuringud hematopoeetilistes süsteemides olid saadud GSK-ga uuringutes, millel oli retroviiruse geenide ülekanne. Täiskasvanud loomadel säilitab hematopoeesi paljud GSK-st pärinevad samaaegselt toimivad hemopoeetilised kloonid. Kloonide järjestuse fenomeni põhjal töötati välja GCS-i identifitseerimiseks kasutuselevõtt. Selle põhimõtte kohaselt, eristada pikaajalisi HSC (pikaajalise vereloome tüvirakkude, LT-HSC), on võimalik taastada vereloomesüsteemi elukestva õppe ja lühiajaliste HSC, et seda ülesannet täita piiratud aja jooksul.

Kui vaatleme vereloome tüvirakkude arvu poolest repopulyatsionnogo lähenemisviisi iseloomuliku vereloome loote maksarakke on nende võime luua koloonia, mis suurus on palju suurem kui need, kellel on suurenenud GSK nabaväädivere või luuüdi, ning see kehtib kõikide kolooniaid. See fakt näitab kõrgemat proliferatsioonivõimega vereloome loote maksarakke. Omapäraks vereloome eellasrakkude Iootemaksa - lühem võrreldes teiste allikate rakutsükli, mis on oluline vaatepunktist tõhususe taasasustamisse vereloomet transplantatsiooni. Analüüs rakulise koostise vereloome peatamise saadud allikatest küpse organismi näitab, et kõigil ontogeny tuumaga rakkudes soodsalt esindatud lõplikult diferentseerunud rakkude arv ja fenotüübi, mis sõltuvad vanusest doonori vereloome ontogenetic kude. Eelkõige suspensiooniga ühetuumalised luuüdis ja nabaväädivererakkude rohkem kui 50% koosnevad küpse lümfoidiliini rakud, arvestades vähem kui 10% lümfotsüütide leitud Iootemaksa hemopoieetiliste kude. Lisaks müeloidse line rakkude Iootemaksa ja loote erütrodide soodsalt esitletakse järgmisel, samas nabaväädivere ja luuüdi granulotsüütmakrofaagi prevaleerib elemente.

Tähtis on see, et loote maks sisaldab komplekt varaseim hematopoeetilised. Viimaste hulgas tuleb märkida erütrodide, granulopoeticheskie, megakariopoeticheskie ja multilinear kolooniatmoodustavat rakkudes. Nende primitiivsem eellastest - MTK-IC - suudavad paljuneda ja diferentseeruvad in vitro 5 või enam nädalat ja ka säilitada funktsionaalset aktiivsust pärast implantatsiooni kehas saaja allogeense ja isegi ksenogeense transplantatsiooni immuunpuudulikesse loomadel.

Bioloogilised teostatavuse ülekaal loote erütrodide maksarakud (kuni 90% kogu Vereloomerakkude) tingitud vajadusest anda erütrotsüütide mass suureneb kiiresti verehulgast arenevale lootele. In Iootemaksa erütropoeesi tuuma erütrodide lähteainete esindatud erineva küpsuse sisaldas lootehemoglobiini (a2u7), mis on tingitud suurem afiinsus hapniku tagab tõhusa imendumise Viimasel ema verest. Intensiivistumine erütropoeesi Iootemaksa seostatakse paikset suurenemist sünteesi erütropoetiini (EPO). Väärib märkimist, et rakendamise hematopoeetiliseks potentsiaali vereloome loote maksarakke piisavalt juuresolekul üksi erütropoetiini, arvestades tüvega laiaulatuslikule erütropoeesi luuüdi HSC ja nabaväädivererakkude vaja ühendada tsütokiinide ja kasvufaktorite kuhu kuuluvad EPO, SCF, GM-CSF ja IL-3. Praeguses varases vereloome eraldatud rakkudest Iootemaksa ilma retseptorid EPO, kes ei reageeri eksogeense erütropoetiini. Induktsiooniks erütropoeesi suspensioonis Iootemaksa mononukleaarsed rakud nõuab esinemist rohkem arenenud eritropoetinchuvstvitelnyh rakkude fenotüübile CD34 + CD38 +, mis ekspresseerivad EPO retseptori.

Kirjanduses ei ole veel moodustatud konsensuse loomise hematopöees embrüonaalsete jooksul. Ei ole kindlaks olemasolu ja funktsionaalne tähendus lisa- ja intraembrionalnyh allikad vereloome rakke. Siiski ei ole mingit kahtlust, et embrüogeneesis inimmaksa on keskne elundi vereloomet ja 6-12 rasedusnädalal on peamiseks allikaks vereloome tüvirakkude arvu, et asustada põrn, harknääre ja luuüdi, GDR saavutada seotud funktsioone eel- ja pärast sünnitust arengut.

Veel tuleb märkida, et embrüonaalset maksa võrreldes teiste allikatega iseloomustab HSC kõrgeim sisaldus. Ligikaudu 30% embrüonaalse maksa CD344 rakkudest on CD38 fenotüüp. Samal ajal ei ole lümfoidsete eellasrakkude arv (CD45 +) hematopoeesi varajastes staadiumides maksas enam kui 4%. Selgus, et kuna loote 7-17 rasedusnädalal arv B lümfotsüütide progresseerub igakuise "samm" on 1,1%, samas kui tase GSK püsivalt vähenenud.

Funktsionaalne aktiivsus vereloome tüvirakkude on sõltuv ka embrüonaalse arengu allikas. Uurimine maksarakkude kolooniatemoodustamise aktiivsuse Inimloodet 6-8 minutit ja 9-12 minutit rasedusnädalal kultiveerimisel pooltahke keskmise kohalolekul SCF, GM-CSF, IL-3, IL-6 ja EPO näitas, et pesade koguarv 1 , HSV embrüonaalse maksu külvamisel 5 korda kõrgem. Samal ajal, kui palju maksa eellasrakud müelopoeesis CFU-GEMM, 6-8 nädalat embrüogeneesi on rohkem kui kolm korda rohkem temperatuuril 9-12 rasedusnädalal. Üldiselt maksa hematopoeetiliseks kolooniatemoodustamise aktiivsuse esimese trimestri tiinus embrüorakkudest oli märgatavalt suurem kui loote maksarakke teise trimestri.

Ülaltoodud andmed näitavad, et Iootemaksa alguses embrüogeneesis iseloomustab mitte ainult kõrge sisaldus vereloome varaste eellasrakud, kuid selle Vereloomerakkude iseloomustab laia diferentseerumist erinevate rakuliinide. Need omadused funktsionaalset aktiivsust varre hematopoeetiliseks loote maksarakke võib olla mõningane kliiniline tähtsus, sest nende kvalitatiivseid omadusi võimaldavad oodata ravitoime väljendatuna siirdamise isegi väikeses koguses marjast saadud algetappidel tiinus.

Sellest hoolimata on tõhusaks siirdamiseks vajalik hematopoeetiliste tüvirakkude arv probleem avatud ja asjakohane. Selle probleemi lahendamiseks tehakse katseid, kasutades in vitro embrüonaalse maksa vereloomenekrootide isepigmenteeruva reproduktiivsuse suurt potentsiaali, stimuleerides neid tsütokiinide ja kasvufaktoritega. Ühtlasel perfusioonibioreaktorist varase Iootemaksa HSC väljastusluuk 2-3 päeva Ei saa vereloome tüvirakkude 15 korda nende esialgset taset. Võrdluseks tuleb märkida, et HSC juureveri saagise 20-kordsel tõusuks samades tingimustes kulub vähemalt kaks nädalat.

Seetõttu Iootemaksa erineb teistest allikatest vereloome tüvirakkude sisaldavad rohkem pühendunud ja varase vereloome rakkudes. Kultuuris loote maksarakke Kasvufaktoritega koos fenotüübi CD34 + CD45Ra1 CD71l0W vormis 30 korda rohkem kolooniaid kui sarnastel nabaväädivererakkude ja 90 korda rohkem kui luuüdi HSC. Kõige märgatavam nendest allikatest erinev sisu varase vereloome moodustavate rakkude segatüüpi kolooniad - mitmeid CFU-GEMM Iootemaksa ületavad selle nabaväädivere ja luuüdi vastavalt 60 ja 250 korda.

Tähtis on, et kuni 18. Nädalal embrüonaalse arengu (aasta alguses vereloomet luuüdis) on hemopoieetiliste funktsiooni rakendamine hõlmab rohkem kui 60% maksa rakke. Kuna enne 13. Nädalal loote arengu inimestel puuduvad harknääre ja tümotsüütides vastavalt siirdamise vereloome loote maksarakke 6-12 rasedusnädalal oluliselt vähendab reaktsiooni "transplantaat peremehe" ja ei nõua valikul histoloogiliselt doonori, sest see võimaldab suhteliselt lihtne saavutada hemopoeetiline kimäärsus.