Hematopoeetilised tüvirakud

Vereloome tüvirakkude (HSC rakud) nagu mesenhümaalseid eellasrakke iseloomustab multipotentsuse ja tekitada rakuliine, lõplike osi, mis moodustavad vererakud ja mõned spetsialiseerunud koerakud immuunsüsteemi.

Hüpoteesi olemasolust ühine eellane kõikide vererakkude, samuti mõiste "tüviraku", mille omanikuks A. Maximovi (1909) Potentsiaalsed moodustumist rakumassi alates GSK tohutu -. Luuüdi tüvirakkudest toota 10. Päeval rakud, mis moodustavad verelibled perifeerse ise. Olemasolu vereloome tüvirakkude loodi 1961 eksperimente taastamiseks vereloomet saanud hiirtel letaalse doosi kiiritust mis hävitab luuüdi tüvirakke. Pos st siirdamise Süngeensete luuüdi rakke nii surmavalt kiiritatud loomade diskreetse koldeid vereloomet tuvastati põrnas saajate mille allikaks - ühekordne klonogeenses eellasrakud.

Siis demonstreeriti hematopoeetiliste tüvirakkude võimet enesekindlust toetada, mis tagab hematopoeesi funktsiooni ontogeneesi ajal. Embrüonaalse arengu protsessis iseloomustavad HSC-d suure rände aktiivsusega, mis on vajalik nende migratsiooniks hematopoeetilistesse elunditesse. HSC-de omadus säilitatakse ka ontogeneesil - nende pideva migratsiooni tõttu toimub immunokompetentsete rakkude kogumi pidev uuenemine. Võime GSK migratsioon, läbimist veregrupi koebarjääre, implantatsiooni kudede kasvu ja klonogeenses andis aluse luuüdi siirdamine rakkude mitmete haiguste seostatakse häiretega vereloomesüsteemi.

Nagu kõik tüvirakkude ressursse, vereloome tüvirakkude esinevad oma niši (luuüdi) väga väikestes kogustes, mis viib teatud raskusi nende eraldamise. Immunofenotüpiseerimise inimese HSC iseloomustatakse kui CD34 + NK-rakud on võimelised rändavad vereringesse ja koloniseerida elundite immuunsüsteemi või repopulate luuüdi strooma. On vaja selgelt mõista, et GSK ei ole kõige ebaküpsed luuüdi rakke ning pärinevad lähteainete, sisaldades dormantnye fibroblastide SB34-negatiivsete rakkude. Selgus, et rakkude fenotüüpi CD34 on võimalik siseneda vereringesse, kus fenotüüp muutub CD34 +, kuid remigratsioon luuüdis mõjul mikrokeskkonda jälle CD34-negatiivsed tüvirakkude elemente. Rahuolekus ~ CD34-rakud ei reageeri parakriinse reguleerivad signaalid strooma (tsütokiine). Kuid kui on vaja amplifikatsiooni osatähtsus vereloome tüvirakkude arvu koos fenotüübi CD34 reageerida diferentseerumise signaalid moodustavad hematopoeetilisest ja mesenhümaalseid eellasrakke. Vereloomet viiakse läbi otsese kontakti kaudu GSK rakulised elemendid luuüdi strooma esitatud komplekssest võrgust makrofaagid, retikulaartuumas endoteelirakkude osteoblastid, stromaalsete fibroblastide ja ekstratsellulaarse maatriksiga. Luuüdi stromaalsete raamistiku - mitte ainult maatriksis või "skelett" jaoks vereloomekudedega, ta teostab trahvi regulatsioon vereloomet tingitud parakriinne reguleerivad signaalid kasvufaktoreid, tsütokiinide ja kemokiinide, samuti esitatakse adhesiivsetes interaktsioonides moodustamiseks vajalikud vereliblesid.

Seega alusel ajakohastatakse pidevalt vereloomesüsteemi peitub pluripotentsed (seisukohalt vereloomet) vereloome tüvirakkude võimeline pikaajalise iseuuenemisprotsessi. HK-de toimeprotsessi käigus läbitakse peamine diferentseerumine ja moodustuvad rakkude kloonid, mis erinevad oma tsütomorfoloogiliste ja immunophenotüüpsete omaduste poolest. Primitiivsete ja toimeeliste eellasrakkude järjestikune moodustamine lõpeb erinevate hematopoeetiliste joonte morfoloogiliselt tuvastatavate esivarakkude moodustamisega. Tulemusena järgmisteks etappideks kompleksi mitmeastmeline protsess on küpsemise Vereloomerakkude ja saagist küpse perifeerse vere moodustatud elementide - erütrotsüütide leukotsüüdid, lümfotsüüdid ja vereliistakud.

[1], [2], [3],

Vereloome tüvirakkude allikad

Vereloome tüvirakkude arvu peetakse kõige enam uuritud varre reeglitega, mis on suuresti tingitud nende kasutamist kliiniku luuüdi siirdamise. Esmapilgul on nende rakkude kohta palju teada. Mõningal määral on see tõsi, sest vahe- ja küpse järeltulijate GSK - soodsaim rakulised elemendid, millest igaüks (erütrotsüüdid, leukotsüüdid, lümfotsüüdid, monotsüüdid / makrofaagid ja vereliistakud) on põhjalikult uuritud kõigil tasanditel - heledast elektronmikroskoopias alates biokeemilised ja immunofenotüübilised omadused enne identifitseerimist PCR-analüüsiga. Kuid teostatud järelevalve morfoloogilised, ultrastrukturaalsed, biokeemiliste immunofenotüpiseerimise ja biofüüsikalisi parameetrid genoomse GSK ei ole andnud vastuseid paljudele valupunkti, mille lahendamine on vajalik arengu siirdamist. Ei ole veel kehtestatud stabiliseerimise mehhanismide GSK uinunud olekus, nad on aktiveeritud, sisestage etapi sümmeetrilise või asümmeetrilise jagunemise, ja mis kõige tähtsam - pühendumist hariduse funktsionaalselt erinevate vererakkude erütrotsüüdid, leukotsüüdid, lümfotsüütide ja trombotsüütide.

Esinemine luuüdis rakkude fenotüübile CD34, mis on esivanemad nii Mesenhümaalsed ja vereloome tüvirakkude arvu tõstnud olemasolu küsimust varaseima lähedaste CD34-negatiivsete rakkude eellasrakkude diferentseerumist ja vereloomesüsteemi stromaalsete liin. Pikenenud Viljelusviisi saadi niinimetatud pikaajalise kultuuri "algatamise 'rakud (pikaajalise kultuuri-algatamise cell - MTK-IC). Eluaegset selliste tüvirakkude kolooniat moodustavat toimet luuüdi stroomarakkude kombinatsioonil põhinevad kasvufaktoreid on üle 5 nädalat, arvestades elujõulisust pühendunud kolooniat moodustavat ühikut (CFU) kultuur ainult 3 nädalat. Arvatakse, et MTK-IC - funktsionaalset analoogi Gcw nagu repopulyatsionnom kõrgel potentsiaali umbes 20% MTK-IC iseloomustab fenotüübi CD34 + CD38- ja eksponeerida kõrgendatud võime eneseuuenduse. Sellised rakud leidub inimese luuüdi sagedusele 01:50 000. Siiski tuleb tunnistada, limfoidoinitsiiruyuschie-müeloidrakkude lähim HSC mis saadakse tingimustes pikaajalise (15 nädalat) kultuuri. Sellised rakud on määratud MTK seas Inimese luuüdi leidub 10 korda vähem kui MTK-IC ja on moodustatud müeloidse rakuliine ja lümfisüsteem hemopoieetiliste vars.

Kuigi vereloome tüvirakkude arvu märgistamise monoklonaalsete antikehadega, millele järgnes identifitseerimist immunofenotüpiseerimise on peamine identifitseerimise meetodi ja selektiivse sortimiseks vereloome tüvirakkude võimalikku kliinilist kasutamist pühendatud GSK seega piiratud. Blokeerides CD34 retseptori antikehad või muu markeri antigeenide sortimise ajal immunopositiivsete paratamatult omadused muutuvad rakud eraldati sellega. Eelistatavam on HSC immuun-negatiivne sekretsioon magnetilistes kolonnides. Sellisel juhul kasutatakse sorteerimisel reeglina metallikanduril kinnitatud monokloonseid antikehi. Lisaks on oluline, et mõlemad HSC eraldamise meetodid põhinevad fenotüüpilistel, mitte funktsionaalsetel omadustel. Seetõttu on paljud uurijad eelistavad kasutada analüüs klonogeenses parameetrid GSK, mis võimaldab suurus ja koosseis kolooniad määramiseks küpsusastme ja suund diferentseerumist eellasrakud. On teada, et rakkude arvu ja nende liikide arv koloonias väheneb. Vereloome tüvirakkude ja selle tütarrakk varase, mida nimetatakse "granulotsüütide erütrotsüütide monotsüüdisarnased megakariotsitokolonieobrazuyuschaya unit" (SFU-GEMM), luua kultuuri multilinear suuri kolooniaid, mis sisaldavad vastavalt granulotsüüdid, erütrotsüüdid, monotsüüdid ja Megakarüotsüütides. Asetseb allpool line granulotsüütide tüvega laiaulatuslikule monotsitokolonieobrazuyuschaya ühiku (SFU-GM) genereerib kolooniad granulotsüütide ja makrofaagide ja granulotsüütseid kolooniat moodustavat ühikut (SFU-G) - üksnes väikesi kolooniad küpsete granulotsüüdid. Varase erütrotsüütide eelkäija - burstoobrazuyuschaya ühiku vere punaliblede (SFU-E) - on allikas suurte ja küpsema punaliblede kolooniat moodustav üksus (SFU-E) - väikeste punaste vereliblede kolooniad. Üldpopulatsioonis koos rakkude kasvu pooltahke meedia võib selgitada moodustavate rakkude kuut liiki müeloidse kolooniad: SFU-GEMM, GM-SFU, SFU-G, M-SFU, VFU-E ja E-SFU).

Kuid lisaks hematopoeetilistele derivaatidele sisaldab HSC eraldamise mis tahes lähtematerjal märkimisväärse arvu samaaegselt kasutatavaid rakke. Sellega seoses on vaja siiriku esialgset puhastamist, eelkõige doonori immuunsüsteemi aktiivsetest rakkudest. Tavaliselt kasutatakse spetsiifiliste antigeenide lümfotsüütide ekspressioonil põhinevat immunosektsiooni, mis võimaldab neid isoleerida ja eemaldada monokloonsete antikehadega. Lisaks tehnikat immunorozetochnaya T-lümfotsüüdi vaesestatud luuüdi siirdamist, mis põhineb komplekside moodustumist CD4 + lümfotsüütide ja spetsiifiliste monoklonaalsete antikehade efektiivselt eemaldada afereesi. See meetod tagab puhastatud rakumaterjali 40-60% hematopoeetiliste tüvirakkudega.

Arvu suurendamine eellasrakud eemaldamise tõttu küpsete vereliblesid leukafereesiprodukti saavutatakse vastuvoolu tsentrifuugimise järgnes filtreerimine (kohalolekul kelaator - trinaatriumtsitraadist) läbi kolonni, mis sisaldas nailonkiude kaetud inimese immunoglobuliini. Järjestikust kasutamist need kaks tehnikat annab täieliku puhastust siiriku vereliistakutest 89% - erütrotsüütide ja 91% võrra - leukotsüütidest. HSC kahjude olulise vähenemise tõttu võib CD34 + rakkude kogurakkude massi suurendada 50% -ni.

Isiklike hematopoeetiliste tüvirakkude funktsionaalsete omaduste jaoks kasutatakse nende võimet luua küpsetest vereliikmete kolooniad kultuuris. Moodustatud kolooniate analüüs võimaldab tuvastada ja kvantifitseerida eellasrakkude tüüpe, nende toimepanemise määra ja määrata kindlaks nende eristamise suund. Klonogeenilisi aktiivsus määratakse pooltahke meedia, metüültselluloosi, agar, plasma- või fibriini geelid, rakkude migratsiooni aktiivsust vähendada, ennetada nende kinnitamise pinnale klaas või plastik. Optimaalsete kultiveerimistingimuste korral areneb üksikrakkude kloon 7-18 päeva jooksul. Kui kloonis on vähem kui 50 rakku, määratakse see üheks klastriks, kui rakkude arv ületab 50 - kui koloonia. Arvesse võetakse kolooniat moodustavate rakkude (koloonia moodustavate ühikute - CFU või kolooniat moodustavate rakkude - COC) arv. Tuleb märkida, et parameetrid ja CFU COC vasta mitmeid HSC rakususpensioonis, kuigi see korreleerub et jällegi rõhutab vajadust selgitada funktsionaalse (kolooniat moodustavat) aktiivsust HSC in vitro.

Luuüdi rakkudest on hematopoeetiliste tüvirakkude suurim proliferatiivne potentsiaal, mille tõttu kultuuris moodustuvad suurimad kolooniad. Selliste kolooniate arvu järgi tehakse ettepanek kaudselt kindlaks määrata tüvirakkude arv. Pärast kolooniate moodustumise in vitro ületa 0,5 mm läbimõõduga ja rakkude arv 1000, autorid on testitud stabiilsust nende rakkude Subletaalne annustes 5-fluorouratsiili ja uuriti nende võimet repopulate luuüdi surmavalt kiiritatud loomadel. Nende parameetrite kohaselt ei erinenud isoleeritud rakud oluliselt HSC-st ja nad said lühendi sümbolit HPP-CFC - kõrge proliferatiivse potentsiaaliga kolooniaid moodustavaid rakke.

Jätkub hematopoeetiliste tüvirakkude kvalitatiivse valiku võimaluse otsimine. Kuid vereloome tüvirakkude arvu on morfoloogiliselt sarnased lümfotsüüdid ja on suhteliselt ühtlane rakukollektsiooniks peaaegu ümmargused tuumaga kromatiini ja tahkete slabobazofilnoy väike kogus tsütoplasmas. Täpne arv on raske kindlaks määrata. Eeldatakse, et GSK inimese luuüdis esineb sagedusega 1 tunnis 106 tuumarakke sisaldavate rakkude kohta.

Vereloome tüvirakkude identifitseerimine

Parandada identifitseerimise vereloome tüvirakkude toimub järjestikku või samaaegselt (eeldusel multichannel sorbitaani tere) uurimis- membrannosvyazannyh spekter antigeene, milles GSK fenotüübi CD34 + CD38 tuleks kombineerida puudumine diferentseerumismarkereid lineaarne, eriti antigeenide Immunokompetentsetele rakkudes nagu CD4 ja pinna immunoglobuliinide glükofiini.

Peaaegu kõik hematopoeetiliste tüvirakkude fenotüpiseerimise skeemid hõlmavad CD34 antigeeni määramist. See glükoproteiin molekulmassiga umbes 110 kDa, vedavate mitut glükosüülimissaiti väljendatakse plasma rakumembraani pärast aktiveerimist geeni kromosoomis 1. CD34 molekulide funktsioon on seotud L-selektinoposredovannym interaktsiooni varase vereloome luuüdist pärinevad stromaalsete põhjal. Siiski tuleb meeles pidada, et esinemine CD34 antigeeni raku pinnal lahtrisse kõigest esialgse hinnangu sisu GSK rakususpensioonis, nagu see on väljendatud ja muud vereloome rakkudes ja luuüdi stroomarakkude ja endoteeli rakkudes.

Hematopoeetiliste eellasrakkude diferentseerumise ajal vähendatakse CD34 ekspressiooni püsivalt. Erütrotsüüdid, granulotsüüdid ja monotsüütidega seotud progenitoorrakud kas nõrgesti ekspresseerivad CD34 antigeeni või üldse puuduvad nende pinnal (fenotüüp CD34). Luuüdi ja küpsete vererakkude diferentseerunud rakkude pinnamembraanil ei leita CD34 antigeeni.

Tuleb märkida, et dünaamika diferentseerumise vereloome eellasrakkude mitte ainult ei vähenda ekspressioonitaset CD34, kuid paralleelselt suurendati ekspressiooni CD38 antigeeni - lahutamatuks membraani glükoproteiin molekulmassiga 46 kDa millel NAD-glikogidrolaznoy ja ADP-ribosüültsüklaasi aktiivsus, mis viitab selle kaasamist ADP-riboosi transportis ja sünteesis. Seega on võimalik topeltkontrolli aste kohustust vereloome eellasrakud. Rakupopulatsioon fenotüübile CD34 + CD38 +, 90-99% CD34-positiivsete luuüdi rakud sisaldab eellasrakke piiratud proliferatiivsete potentsiaali ja diferentseerumine, arvestades koos fenotüübi CD34 + CD38 rakud ei saa väita rolli GSK.

Tõepoolest, populatsioon luuüdi rakud, mida on kirjeldanud valemiga CD34 + CD38-, sisaldab suhteliselt palju primitiivse tüvirakud on võimelised diferentseeruma müeloidse ja lümfikude. Seoses pikaajalisel kasvatamisel koos fenotüübile CD34 + CD38- rakud õnnestub kõik küpse vererakud: neutrofiilid, eosinofiilid, basofiilid, monotsüüdid, Megakarüotsüütides erütrotsüüdid ja lümfotsüüte.

Suhteliselt hiljuti leiti, et CD34-positiivsete rakkude väljendada veel kaks markerit - AC133 ja CD90 (Thy-1), mida kasutatakse ka selgitada vereloome tüvirakkude arvu. Thy-1 antigeen kaasekspresseeriti retseptoriga CD117 (c-kit) CD34 + rakud luuüdi, juhtme ja perifeerse vere. See fosfatidilinozitolsvyazyvayuschy pinna glükoproteiin molekulmassiga 25-35 kDa, mis osaleb raku adhesiooni protsesse. Mõned autorid usuvad, et Thy-1 antigeeni markeri kõige ebaküps CD34-positiivsete rakkude. Kopeerimine rakkude fenotüüpi CD34 + Thy-1 + tekitada pikaajalist kultiveeritud read moodustavad tütarrakkude. On soovitatav, et Thy-1 antigeen blokeerib reguleerivad signaalid, mis põhjustavad rakkude jagunemise peatumist. Vaatamata sellele, et CD34 + TU1 + rakud on võimelised ise uuendamine ja loomine pikaajaline kultiveeritud read, nende fenotüübi ei puuduta ainult HSC, kui Su-1 + sisu kogumassist CD34-positiivsete rakkude elemendid on umbes 50%, mis ületab kaugelt hematopoeetiliste rakkude arv.

Hematopoeetiliste tüvirakkude identifitseerimiseks on paljutõotavam AC133, hematopoeesi prekursorrakkude antigeenimarker, mille ekspressioon tuvastati esmakordselt embrüonaalsetel maksarakkudel. AC133 on transkriptaan glükoproteiin, mis ilmub GSK laagerdamise varases staadiumis rakumembraani pinnal - see on võimalik, et isegi varem kui antigeen CD34. A. Petrenko ja V. Grishchenko (2003) uuringutes leiti, et AC133 ekspresseerib kuni 30% embrüonaalse maksa CD34-positiivsetest rakkudest.

Seega suurepärane fenotüübilise profiil vereloome tüvirakkude tänaseks kontseptsioonide summa raku kontuur, lülitustes, mis peab sisalduma CD34 antigeenide konfiguratsioonis AC133 ja Thy-1, kuid puudub koht molekulaarseks projektsioonid CD38, HLA-DR ja markerid lineaarne diferentseerumise GPA CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

HSC fenotüübilise portree variatsioon võib olla CD34 + CD45RalowCD71low kombinatsioon, kuna selle valemi poolt kirjeldatud rakkude omadused ei erine fenotüübi CD34 + CD38 rakkude funktsionaalsetest parameetritest. Lisaks sellele võib inimese GSK-d identifitseerida CD34 + Thy-1 + CD38Iow / c-kit / madala fenotüübiliste tunnustega - ainult nendest rakkudest täielikult taastatakse hiirtel hematopoees.

Alates analüüsi üldise fenotüübitunnuste luuüdi rakkude tegelikult algas 40 aastat kestnud uuringuid GSK üheaegselt võimeline nii iseuuenemisprotsessi ja diferentseerumise teiste rakuliste elementide, mis võimaldab õigustada luuüdi siirdamine ravida erinevaid patoloogiaid vereloomesüsteemi. Hiljuti avastatud uut tüüpi tüvirakke pole kliinilises praktikas veel laialdaselt kasutatud. Kuid saadud tüvirakke nabanööri (juhtmest) veri ja loote maksas võib oluliselt laiendada rakutransplantatsioonis mitte ainult hematoloogia, vaid ka teistes meditsiinis, erinedes HSC luuüdi kvantitatiivse tulemuste bioloogilisi omadusi.

Siirdamiseks vajaliku varre hematopoeetilise rakumassi maht saadakse tavaliselt luuüdist, perifeersest ja nabaväädi verest ning ka embrüonaalsest maksast. Peale selle võib hematopoeesi eellasrakke in vitro saada ESC-de paljundamise teel, seejärel suunatakse nende suunav diferentseerumine hematopoeetiliste rakkudele. A. Petrenko, V. Grishchenko (2003) õigesti märgivad olulisi erinevusi immunoloogiliste omaduste ja võime taastada vereloomet GSK erineva päritoluga tõttu ebavõrdse suhte sisalduvad nende allikate pluripotentsed alguses ja hiljem pühendunud eellasrakkude. Lisaks on erinevatest tüviallikatest pärinevad hematopoeetilised tüvirakud kvantitatiivselt ja kvalitatiivselt täiesti erinevad mitte-hemopoeetiliste rakkude seosed.

Traditsiooniline hematopoeetiliste tüvirakkude allikas on luuüdi. Luuüdi rakkude suspensioon saadakse kõhu luust või rinnast leostumise teel kohaliku anesteesia abil. Selliselt saadud suspensioon on heterogeenne ja sisaldab HSC-i, strooma rakkude elemente, müeloidi- ja lümfoidjoonte esinevaid eellasrakke, samuti küpseid vereelemente. Luuüdi mononukleaarsete rakkude hulgas fenotüüpide CD34 + ja CD34 + CD38 rakkude arv on vastavalt 0,5 kuni 3,6 ja 0,5-0,5%. Perifeerne veri pärast GSCF esilekutsutud HSC mobiliseerimist sisaldab 0,4-1,6% CD34 + ja 0-0,4% CD34 + CD38-st.

Kõrgem rakkude protsent CD34 + CD38 immuunfenotüübi ja CD34 + nabanööri verest - ja 0-0,6 OD-2,6%, ja nende maksimaalne arv on avastatud seas hematopoeetiliseks loote maksarakke - ja 2,3 0,2-12,5 -35,8%.

Kuid kvaliteeti siiriku materjali sõltub mitte ainult summa nendes sisalduvate CD34 + rakkude, vaid ka nende funktsionaalne aktiivsus, mida saab arvutada järgmise taseme kolooniatemoodustamise in vivo (luuüdi taastamispoliitika in surmavalt kiiritatud loomade puhul) ja in vitro - kasvu kolooniad pooltahket meedia . Selgus, et kolooniatemoodustamise ja proliferatiivsed aktiivsust hemopoieetiliste eellasrakke fenotüübi CD34 + CD38 HLA-DR, eraldatud loote maksas, loote luuüdi ja nabaväädivere ja tunduvalt suurem proliferatsioonivõimega vereloome kolooniatmoodustavat rakud luuüdis ja perifeerses veres täiskasvanu. Kvantitatiivne ja kvalitatiivne analüüs GSK erineva päritoluga näitas olulisi erinevusi nende suhteline sisaldus rakus peatamise ja funktsionaalsust. Maksimaalne arv CD34 + rakke (24,6%), mida täheldati siiriku hävitamisel loote luuüdi. Täiskasvanud inimese luuüdi sisaldab 2,1% CD34-positiivsetest rakuelementidest. Seas mononukleaarrakud Täiskasvanud inimese perifeerse vere 0.5% on fenotüübi CD34 +, arvestades nabaväädivere nende summa jõuab 2%. Seega võime moodustada kolooniaid CD34 + rakud loote luuüdi 2,7 korda suurem läbilaskevõime Klonaalse kasvu vereloome luuüdis täiskasvanud inimese rakkudes ja nabaväädivere rakud moodustavad oluliselt suurem kolooniad kui hematopoeetiliseks elemendid perifeersest verest eraldatud täiskasvanutest: 65,5-40 ja , 8 kolooniat / 105 rakku.

Vereloome tüvirakkude proliferatiivse aktiivsuse ja kolooniate moodustamise võime erinevused on seotud mitte ainult nende küpsuse eri astmetega, vaid ka nende loodusliku mikrokeskkonnaga. On teada, et intensiivsus proliferatsiooni ja diferentseerumist tüvirakud kiirusega, mis sõltub integraalne reguleeriva mõju mitmekomponentsete süsteemi kasvufaktoreid ja tsütokiinid, mida toodetakse nii tüvirakke ja rakulised elemendid maatriksit stromaalsete mikrokeskkonda. Kasutades puhastatud rakupopulatsioonide ja seerumivabas söötmes eesmärgiga rakukultuuris andes iseloomustatud kasvufaktoreid, millel on stimuleeriv ja inhibeeriv toime tüvirakud erinevatel tasanditel, eellasrakud ja rakkude toime konkreetses lineaarne suunas. Läbiviidud uuringute tulemused tõestavad veenvalt, et GSK, mis on saadud erineva tasemega ontogeneetilise arengu allikatest, erineb nii fenotüüpiliselt kui ka funktsionaalselt. GSK jaoks püsib endisesse ontogeensuse varasematel etappidel, mida iseloomustab suur enesetalitlusvõime ja suur proliferatiivne aktiivsus. Selliseid rakke eristatakse pikemate telomeeride pikkusega ja allutatakse hematopoeetiliste rakuliinide moodustumisele. Immuunsüsteemi reaktsioon HSC-i embrüonaalsele päritolule lükkub edasi, kuna sellised rakud väljendada kergelt HLA molekule. On selge gradatsioon suhteline sisaldus HSC ja nende võimele ise uueneda ja ridade arvu moodustavad nad tüüpi laiaulatuslikule: CD34 + rakud Iootemaksa> CD34 + rakkude nabaväädivere> CD34 + rakud luuüdis. Oluline on, et selliseid erinevusi ei ole ainuomased intra- ja neo postanatalnomu algperioodiga inimese arengusse, vaid ka kogu ontogeny - proliferatiivsetele ja koloonia moodustamise võime HSC saadud luuüdi või perifeerse vere täiskasvanu, pöördvõrdeline vanusest doonorile.