Herpese diagnoosimine

Diagnoos herpes põhineb käitumise klassikaline viiruse leviku tundlikes rakukultuuride immunofluorestsentskujutised ja seroloogiliste meetoditega, läbiviimiseks colposcopic uuringud, kasutades kaasaegseid molekulaar- bioloogiliste meetoditega (PCR, dot-hübridisatsiooni), mis võimaldab teil diagnoosida herpesviiruse rühma, sealhulgas HHV-6 ja HHV-7 tüübid.

Herpeetiline infektsiooni laboratoorsed diagnoosimise meetodid

Peamised meetodid, mille eesmärk on HSV sekreteerimine või viiruseosakeste ja / või nende komponentide tuvastamine	Abimeetodid, mille eesmärk on tuvastada HSV antikehi inimese keha bioloogilistes vedelikes
HSV eraldamine rakkude ja loomade tundlikes kultuurides Otsene ja immuun-elektronmikroskoopia Otsesed ja kaudsed MFA-võimalused IFA Molekulaarbioloogilised meetodid Lateks aglutinatsioonireaktsioon	Neutraliseerimisreaktsioon RSK HSV-1,2 mittestruktuursete valkude antikehade määramine

On näidatud, et 76% -l patsientidest esineb HSV-2 põhjustatud suguelundite herpese (GH) ja HSV-1 tüüpi 24% -l. Ja GG monoinfektsioonina esines ainult 22% patsientidest, 78% juhtudest avastati mikroobide ühendused. 46% -l patsientidest avastati kahest patogeenist põhjustatud parasitotsenoos, sealhulgas 40% -l juhtudest avastati klamüüdia. Vähem sagedamini määrdunud gardnerelly, Trichomonas, gonokokkid.

27% -l patsientidest oli parasitotsenoos esindatud kolm ja neli patogeeni 5,2%. Veelgi sagedamini märgiti sagedamini klomidioosi kombinatsiooni Gardnerella ja Candida perekonna seentega. Need andmed õigustavad vajadust põhjaliku bakterioloogilist kontrolli patsientide YY selgitada patogeeniga kombinatsioonid, samuti süvauuringuga patogeneesis segainfektsioonidega urogenitaaltrakti, mis võimaldaks diferentseeritud kompleksi teraapias HSV infektsioon.

Materjalid, mida tuleb uurida HSV eraldamisel sõltuvalt herpese kahjustuste paiknemisest

Lokaliseerimine kahjustuste	Vesiikulite sisu	Rakkude kraapimine				SDC	Aspireerige bronhidest	Bioptat	Veri
		1	2	3	4
Nahk	+								+
Silmad			+						+
Genitaalid				+					+
Anus	+				+				+
Suu	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Kerge kaal		+					+		+
Maks								+	+
Kaasasündinud herpes	+	+	+				+		+

Tsütomegaloviiruse infektsiooni laboratoorsed uuringud

Meetodid	Tulemuste saavutamiseks kuluv aeg	Märkused
VIRUAALSED
Elektronmikroskoopia	3 tundi	Hirmutav
Viiruse eraldamine rakukultuuris (CPD)	4-20 päeva	Standard, aeglane
Varasema AH immuunufluorestsentsvärvimine monokloonsete antikehadega	6 tundi	Vähem spetsiifiline
Tsütoloogiline	2-3 tundi	Vähem spetsiifiline
SEOLOOGILINE
RSK	2 päeva	Standart
Ssubsistence	1 päev	Labiajane
REEF	6 tundi	Lihtne, spetsiifiline
NFIF	6 tundi	Keeruline
RIMF	6 tundi	Keeruline
IFA (IgM, TO)	6 tundi	Kiire ja lihtne
Immunoblot	6 tundi	Kallis
MOLEKULAAR-BIOLOOGILINE
MG	5-7 päeva	Kallis, aeganõudev
PCR	3 tundi	Kallis

Herpes zoster-viiruse diagnoosimise meetodid

Diagnostilised meetodid	Laboratoorsed tehnikad
KAUDSEID
Jaotamine	Kangakultuur, kana-embrüod, laboratoorsed loomad, kasvatamine koos lubavate rakkude või helper-viirustega
Isolaatide identifitseerimine	Neutraliseerimisreaktsioon, DSC, IF, IPPE, sademe isolaatide reaktsioon, aglutinatsioon, IF
DIRECT
Tsütoloogia	Smears: värvi immunofluorestsents
Histoloogia	Rakkude patomorfoloogia
Struktuur	Embrüonaalne mikroskoopia, immunoelektrooniline mikroskoopia
Antigeenide määramine	IF, PIÉF, RIM, IFA
Antikehade kohaliku tootmise kindlaksmääramine	Ig M, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekulaarsed bioloogilised lähenemised	Molekulaarne hübridisatsioon, PCR

Herpes zoster-viiruse põhjustatud nakkushaiguste diagnoosimine

Diagnostika probleemid	Meetodid	Oodatavad tulemused
Akuutne primaarne infektsioon	1	Tuvastamine pärast 2 tundi
	2	Antikehade tase kasvab aeglaselt
	3	Olemasolev 3 päeva pärast nakatamist
Äge taasaktiveeritud infektsioon	1	ULV tuvastamine 2 tunni jooksul
	2	Antikehade tase kasvab aeglaselt
	4	Praegu 4 päeva pärast lööve ilmnemist

1. WIEF-i vesiiklite vedeliku määramine;
2. seroloogia: DSC, ELISA, mille eesmärk on identifitseerida
3. Seroloogia: ELISA, mille eesmärk on tuvastada IgM;
4. seroloogia: ELISA, mille eesmärk on tuvastada IgA, IgM.

Herpes zoster-viiruse põhjustatud infektsiooni immuunvastuse indikaatorid

Lähenemisviis	Meetod
Suurenenud antikehade tiitri avastamine teistes seerumites	RSK, RTGA, RPGA, neutralisatsioonireaktsioon IF, RIM, ELISA
IgG, Ig-klassi spetsiifiliste antikehade tuvastamine esimeses seerumiproovis	IFA, IF, RIM, lateks aglutinatsioon

Patsiendi seerumi seroloogilise uuringu tulemuste tõlgendamine herpesviiruse infektsioonide suhtes (ELISA)

Infektsiooni nimi / marker	Infektsioonide keskmised künnised
	Analüüsi tulemused	Tõlgendamine
Tsütomegalia anti-CMV IgG (1-20 E / ml) CMV IgM vastane antikeha (100-300%)	Positiivne 1-6 Positiivne 6-10 Positiivne> 10 Negatiivne Positiivne 100-300 Negatiivne <90 Kahtlustatav 90-100	Remissioon haiguse süvenemine haiguse ägeda faasi nakkus (haigus) haigus äge faas korrata analüüsi pärast 2-3 nädalat
Herpes simple 1.2 serotüübid Anti-HSV 1/2 kokku. (100-900%)	Positiivne 100-400 Positiivne 400-800 Positiivne> 800 Negatiivne <100	Remissioon haiguse süvenemine haiguse ägeda faasi nakkus (haigus)

Tabelis on toodud herpesviiruste infektsioonide laboratoorset diagnostikat käsitlevad peamised meetodid ning soovitatavad bioloogilised materjalid, mida uuritakse HSV-de eraldamiseks, võttes arvesse herpese kahjustuste paiknemist

Usaldusväärne on herpes simpleks ja CMV eraldamine tundlike rakukultuuride nakkuse kaudu. Seega, 26-l patsiendil retsidiivi ajal viroloogilises uuringus eraldati HSV tundlik Vero rakukultuur 23-l (88,4%). Nakatunud kultuurides täheldati HSV-le iseloomuliku tsütopaatilise toime struktuuri - mitme tuumaga hiiglaslike rakkude moodustumist või ümardatud ja suurendatud rakkude akumuleerumist kimpude kujul. 52,1% -l juhtudest oli viirus tsütopaatilise toime tuvastamiseks 16-24 tundi pärast nakatumist võimalik tuvastada. Nakatunud kultuuride inkubatsiooni 48-72 tunni jooksul suurenes spetsiifiliste rakkude hävitamist põhjustavate materjalide protsent 87% -ni. Ja ainult 13% juhtudest avastati positiivsed tulemused 96 tundi pärast infektsiooni ja rohkem või korduva läbitöötamisega.

Generaliseerunud herpese infektsiooni laboratoorse diagnoosimise meetodid

Peamised meetodid, mille eesmärgiks on herpesviiruste, nende osakeste ja nende komponentide avastamine (eraldamine)	Abimeetodid, mille eesmärk on tuvastada herpesviiruste antikehi bioloogilistes vedelikes, tuvastada vereserumi ensümaatiline nihkumine
Isoleerimine herpesviiruse vastuvõtliku rakukultuuride ja loomade Direct ja immuunsüsteemi elektronmikroskoopias otsesed ja kaudsed immunoperoksidaas teostusviis otsesed ja kaudsed fluorestseeruva antikeha tehnikat võimalusi valikute ELISA kehastused molekulaarse (DNA-DNA) hübridiseeruma polümeraasi ahelreaktsiooni Reaction lateks aglutinatsiooni	Neutralisatsiooni reaktsioon komplemendi sidumise reaktsiooni lateks aglutinatsiooni Kaudsed fluorestseeruvate antikehade meetodit teostuses Kaudsed immunoperoksidaas meetodi variant kehastused ELISA meetod immuunsüsteemi kuivatuspaber radiaalse komplemendi fikseerimine Method määramine alaniin ja aspartaadi tasemed

Nakkusliku mononukleoosi diagnoosimiseks (VEB põhjustatud infektsioon) kasutatakse seroloogilisi meetodeid. Reaktsioon Paul-Bunnelya lamba erütrotsüütide tiiter 1:28 diagnostiline ja ülalpool Ühes uuringus seerumi või 4-kordne antikehade hulga tõusu uurides seerumite paare. Kasutage Goff-Baueri reaktsiooni hobuse 4% formaliseeritud erütrotsüütide suspensiooniga. Tulemust võetakse arvesse 2 minuti pärast, nakkusliku mononukleoosi korral on reaktsioon väga spetsiifiline.

Praegu arendatakse nakkusliku mononukleoosi diagnoosimiseks ensüümi immuunanalüüsi (ELISA). Sellisel juhul määratakse patsiendi seerumis IgG ja IgM antikehad, inkubeerides seda EBV-ga nakatunud lümfoblastidega, millele järgneb ravi fluorestsentsantikehadega. Haiguse akuutses perioodis määratakse viiruse kapsiidi antigeeni antikehad tiitris 1: 160 ja üle selle.

Kui kasutatakse hulga imporditud kaubanduslikku testsüsteeme IFA suudab tuvastada: antikehade ant Egan EBV ümbriku antikehade embrüonaalse antigeeni EBV üldine antikeha varajasele antigeeni EBV, määrati ägedas faasis haiguse ja tuumas ja tsütoplasmas ning piiratud antikeha EBV varakult, määrati ägedas faasis haiguse ja tuumas ja tsütoplasmas rakud, mis piirneb antikehade EBV embrüonaalse antigeeni, määrati keset haiguse ainult rakkude tsütoplasmas ja antikehade EBV tuuma antigeeni. Nende katsesüsteemide kasutamine võimaldab diferentse diagnoosimist mitmete EBV-ga seotud haiguste puhul.

Pärast positiivse identifitseerimiseks ELISA antikehade EBV saades immuunülekandel kinnitades vastuse, mis tuvastab antikehade olemasolu eraldamiseks EBV markervalke (p-valgud): P23, P54, p72 (juuresolekul valgu viitab võimalusele reprodutseerimise EBV), lk 138. Said Laboratoorsete meetodite abil kasutatakse ravi efektiivsuse kontrollimiseks.

Viroloogiliste meetodite tundlikkus on 85-100%, spetsiifilisus on 100%, õppeaeg on 2-5 päeva. Praktikas kasutatakse sageli otseselt immunofluorestsentsmeetodit (HSV-1 ja HSV-2 vastu suunatud polüklonaalsete või monokloonsete antikehadega). UIF-meetodit on lihtne reprodutseerida tavapärases kliinilises laboris, see ei ole kulukas, tundlikkus ületab 80%, spetsiifilisus on 90-95%. Immuunfluorestsents mikroskoopia näitas juuresolekul tsütoplasmaatilise kandmisel, morfoloogilised tunnused, nakatunud rakkude määrdub, kraabib kusiti, emakakaelakanali, emakakael, pärasool.

UIF-meetod annab ülevaate rakkude morfoloogilistest omadustest ja HSV-antigeenide lokaliseerimise muutustest. Lisaks herpesviiruste (spetsiifilise luminestsentsi tuvastamisele) otseseid märke rakupõletikest, on UIFi andmetel ka herpeseinfektsiooni tunnused:

• tuumamaterjali koondamine, karyoolma koorimine;
• nn. Tuumade "augud", kui raku tuumikust jääb ainult üks karyolemma;
• intranuclear inclusions - Caudry vasika olemasolu.

Seadmisel UIF- arst saab mitte ainult kvaliteedi, vaid ka kvantitatiivne hinnang nakatunud rakke, et meil on kasutada tõhususe hindamiseks viirusevastane ravi acycloviriga (AC). Seega uuriti UIF-meetodil dünaamikaga 80-l lihtsa genitaalherpesega (GG) patsienti. On näidatud, et kui enne ravi atsükloviiri määrdub 88% patsientidest oli kõrge nakatunud rakkude protsendi (50-75% ja rohkem), pärast üht muidugi atsükloviiri määrdub 44% patsientidest, kellel tervetele rakkudele avastati 31% juhtumitest tähistatud üksikute nakatunud rakke ja 25% -l patsientidest oli kuni 10% nakatatud rakkudest.

Nakatunud rakkude sisaldus atsikloviiriga ravitud genitaalherpesega patsientidel (PIF-reaktsioon)

Haigusperioodid	Proportsionaalsus määrdudes
	Nakatunud rakud					Normaalsed rakud
	Üle 75%	50-75%	40-50%	10%	Üksikud rakud n / sp-s
Relapseerumine (enne ravi)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remissioon (pärast ravi)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Kasutades paljude aastate UIF-i ja dot-hübridiseerimise meetodit, langes peaaegu 100% juhtudest uuringu tulemustega. Tuleb märkida, et selleks, et suurendada usaldusväärsust diagnoosimise GH, eriti juhul, kui seal on subkliiniline ja malomanifestnyh vormid herpes, on soovitatav kasutada 2-3 meetod laboratoorse diagnostika, eriti kui uurida rasedate, obsteetrilise ajalugu ebasoodsas olukorras inimesed määratlemata günekoloogiliste diagnoosi.

Nii PCR diagnoos viirus- ja bakteriaalsete infektsioonide urogenitaaltrakti on vaja hinnata positiivsete tulemustega, mis saadi Euroopa ajaloo, juuresolekul (või puudumine) spetsiifilised kliinilised sümptomid. Kui klamüüdia tuvastatakse PCR-ga, siis on sellisel juhul võimalik rääkida infektsioonist ja vastavalt ravida raviprobleeme. Avastamise korral mükoplasmad (ureaplasmas) on oportunistlikud patogeenid, diagnoosi kinnitamiseks on vaja läbi viia kultuuri täiendavaid uuringuid, t. E. Saagi materjali patsient tundlik rakukultuuride. Kultuuri analüüsimisel saab positiivseid tulemusi ainult rääkida mükoplasmoosi diagnoosimise laboratoorsest kinnitamisest. Sama meetod võimaldab vajaduse korral määrata isoleeritud mükoplasmaatide tundlikkust sageli kasutatavatele ravimvormidele (antibiootikumid, fluorokinoloonid jne).

Võibolla üheastmelise nakatumisega mitmete Nepresviridae perekonna viirustega. Sageli avastasime ühe HSV-1, HSV-2 ja CMV-viirusega patsiendi nakkuse. Paljude herpesviirustega nakatunud nakkused olid sageli kliinilised ja laboratoorsed ilmingud sekundaarse IDS-ga (onkohematoloogilised, onkoloogilised, HIV-infektsiooniga patsiendid). Seega on näidatud, et kliinilised ja immunoloogilised häired, mis progresseeruvad HIV-nakkusega, kaasnevad molekulaarse hübridiseerimise meetodil avastatud herpesviiruste arvu suurenemisega. Selle prognostiliselt kõige olulisema võib pidada HSV-1, CMV ja HHV-6 tüüpi DNA kompleksseks üheastmeliseks tuvastamiseks.

[1], [2], [3]