^

Tervis

A
A
A

Herpese diagnoosimine

 
, Meditsiiniline toimetaja
Viimati vaadatud: 07.07.2025
 
Fact-checked
х

Kõik iLive'i sisu vaadatakse meditsiiniliselt läbi või seda kontrollitakse, et tagada võimalikult suur faktiline täpsus.

Meil on ranged allhanke juhised ja link ainult mainekate meediakanalite, akadeemiliste teadusasutuste ja võimaluse korral meditsiiniliselt vastastikuste eksperthinnangutega. Pange tähele, et sulgudes ([1], [2] jne) olevad numbrid on nende uuringute linkideks.

Kui tunnete, et mõni meie sisu on ebatäpne, aegunud või muul viisil küsitav, valige see ja vajutage Ctrl + Enter.

Herpese diagnoosimine põhineb klassikalisel viiruse isoleerimisel tundlikel rakukultuuridel, immunofluorestsents- ja seroloogilistel meetoditel, kolposkoopilisel uuringul ning kaasaegsete molekulaarbioloogiliste meetodite (PCR, dot hybridisation) kasutamisel, mis võimaldab diagnoosida kogu herpesviiruste rühma, sealhulgas HHV-6 ja HHV-7 tüüpe.

Herpesinfektsiooni laboratoorsed diagnostikameetodid

Peamised meetodid, mille eesmärk on HSV isoleerimine või viirusosakeste ja/või nende komponentide tuvastamine

Abimeetodid, mille eesmärk on tuvastada HSV antikehi inimkeha bioloogilistes vedelikes

  1. HSV eraldamine tundlikes raku- ja loomakultuurides
  2. Otsene ja immuunne elektronmikroskoopia
  3. IPA otsesed ja kaudsed variandid
  4. IFA
  5. Molekulaarbioloogilised meetodid
  6. Lateksi aglutinatsioonireaktsioon
  1. Neutraliseerimisreaktsioon
  2. RSC
  3. HSV-1,2 mittestruktuursete valkude vastaste antikehade määramine

On näidatud, et 76%-l patsientidest on genitaalherpese (GH) põhjustajaks HSV-2 ja 24%-l HSV-1 tüüp. Lisaks esines GH monoinfektsioonina ainult 22%-l patsientidest, 78%-l juhtudest tuvastati mikroobide seosed. 46%-l inimestest tuvastati kahe patogeeni põhjustatud parasitotsenoos, sealhulgas klamüüdia 40%-l juhtudest. Gardnerella, Trichomonas ja gonokokid tuvastati määrdproovides harvemini.

27%-l patsientidest esines parasitotsenoosi kolme patogeeni ja 5,2%-l nelja patogeeni poolt. Lisaks täheldati kõige sagedamini klamüüdia kombinatsiooni gardnerella ja Candida seentega. Need andmed kinnitavad vajadust GH-ga patsientide põhjaliku bakterioloogilise uuringu järele, et tuvastada patogeenide kombinatsioone, samuti urogenitaaltrakti segainfektsioonide patogeneesi põhjaliku uurimise järele, mis võimaldaks herpesinfektsiooni diferentseeritud kompleksravi.

HSV isoleerimiseks uuritud materjalid sõltuvalt herpeetiliste kahjustuste lokaliseerimisest


Kahjustuste lokaliseerimine


Vesiikulite sisu

Rakkude kraapimine

CSF

Bronhiaalne aspiraat

Biopsia

Veri

1

2

3

4

Nahk

+

+

Silmad

+

+

Suguelundid

+

+

Pärak

+

+

+

Suu

+

+

+

KNS

+

+

+

+

Kopsud

+

+

+

Maks

+

+

Kaasasündinud
herpes

+

+

+

+

+

Tsütomegaloviiruse infektsiooni laboratoorse diagnostika meetodid

Meetodid

Tulemuste saamiseks kuluv aeg

Märkused

VIROLOOGILINE

Elektronmikroskoopia

3 tundi

Pole eriti ligipääsetav

Viiruse isoleerimine rakukultuuris (VCI)

4–20 päeva

Standardne,
aeglane

Varajase AG immunofluorestsentsvärvimine monoklonaalsete antikehade abil

6 tundi

Vähem
spetsiifiline

TSÜTOLOOGIA

2-3 tundi

Vähem
spetsiifiline

SEROLOOGILINE

RSC

2 päeva

Standardne

RGA

1 päev

Töömahukas

RIFF

6 tundi

Lihtne,
konkreetne

NRIF

6 tundi

Raske

RIMP

6 tundi

Raske

ELISA (IgM, DO)

6 tundi

Kiire, lihtne

Immunoblot

6 tundi

Kallis

MOLEKULAARBIOLOOGIA

MG

5-7 päeva

Kallis,
töömahukas

PCR

3 tundi

Kallis

Herpes zoster viiruse diagnoosimise meetodid


Diagnostilised meetodid

Laboratoorsed
meetodid

KAUDNE

Valik

Koekultuur, kanaembrüod, laboriloomad, koekultuur lubavate rakkude või abistajaviirustega

Isolaatide identifitseerimine

Neutralisatsioonireaktsioon, RSC, IF, PIEF, isolaatide sadenemisreaktsioon, aglutinatsioon, IF

OTSE

Tsütoloogia

Määrdumisproovid: värviline immunofluorestsents

Histoloogia

Raku patomorfoloogia

Struktuur

Embrüonaalne mikroskoopia, immunoelektronmikroskoopia

Antigeenide määramine

KUI, PIEF, RIM, IFA

Kohaliku antikehade tootmise määramine

Ig M, Ig G, Ig A: ELISA, RIA

Molekulaarbioloogilised lähenemisviisid

Molekulaarne hübridisatsioon, PCR

Herpes zoster-viiruse põhjustatud infektsiooni laboratoorne diagnostika

Diagnostilised
probleemid

Meetodid

Oodatavad tulemused

Äge primaarne infektsioon

1

Tuvastamine 2 tunni jooksul

2

Antikehade tase tõuseb aeglaselt

3

Esineb 3 päeva pärast nakatumist

Äge
taasaktiveeritud
infektsioon

1

UUU tuvastamine 2 tunni pärast

2

Antikehade tase tõuseb aeglaselt

4

Esineb 4 päeva pärast lööbe ilmnemist

  1. VEGF-i vesiikulite määramine vedelikus;
  2. seroloogia: CSC, ELISA, avastamiseks
  3. seroloogia: ELISA, mille eesmärk on IgM tuvastamine;
  4. seroloogia: ELISA, mille eesmärk on IgA, IgM tuvastamine.

Meetodid herpes zoster viirusnakkuse immuunvastuse määramiseks

Lähenemisviis

Meetod

Antikehade tiitri suurenemise tuvastamine teises seerumis

RSK, RTGA, RPGA, IF neutraliseerimisreaktsioon, RIM, ELISA

Ig G ja Ig A klassi spetsiifiliste antikehade tuvastamine esimeses seerumiproovis

ELISA, IF, RIM, lateksaglutinatsioon

Patsientide seerumite seroloogilise uuringu tulemuste tõlgendamine herpesviirusnakkuste suhtes (ELISA)


Infektsiooni/markeri nimi

Nakkuste keskmised läviväärtused

Analüüsi tulemused

Tõlgendamine

Tsütomegaalia Anti-CMV IgG (1-20 U/ml)

CMV-vastane IgM (100–300%)

Positiivne 1-6 Positiivne 6-10 Positiivne >10
Negatiivne
Positiivne 100-300 Negatiivne <90 Kahtlane 90-100

Remissioon
Haiguse ägenemine
Haiguse äge faas
Nakkust (haigust) ei esine
Haiguse äge faas
Korrake analüüsi 2-3 nädala pärast

Herpes simplex 1, 2 serotüübid
Anti-HSV 1/2 kokku (100–900%)

Positiivne 100–400 Positiivne 400–800 Positiivne >800
Negatiivne <100

Remissioon
Haiguse ägenemine
Haiguse äge faas Nakkust
(haigust) ei esine

Tabelis on esitatud herpesviirusnakkuste laboratoorse diagnostika peamised meetodid, samuti soovitatavad bioloogilised materjalid, mida uuritakse HSV eraldamisel, võttes arvesse herpeetiliste kahjustuste lokaliseerimist.

Herpes simplex- ja CMV-viiruste usaldusväärne isoleerimine tundlike rakukultuuride nakatamise teel. Seega 26 patsiendi viroloogilisel uuringul retsidiivi perioodil isoleeriti HSV tundlikul Vero rakukultuuril 23 juhul (88,4%). Nakatunud kultuurides ilmnes HSV-le tüüpiline tsütopaatiline toime - mitmetuumaliste hiiglaslike rakkude moodustumine või ümarate ja suurenenud rakkude kogunemine klastrite kujul. 52,1% juhtudest oli viiruse tsütopaatilise toime koldeid võimalik tuvastada juba 16-24 tundi pärast nakatumist. Nakatunud kultuuride 48-72 tunniks inkubeerimise ajaks suurenes rakkude spetsiifilist hävimist põhjustavate materjalide osakaal 87% -ni. Ja ainult 13% juhtudest tuvastati positiivsed tulemused 96 tundi või hiljem pärast nakatumist või korduvate passaažide ajal.

Üldise herpese infektsiooni laboratoorse diagnostika meetodid

Peamised meetodid herpesviiruste, nende osakeste ja komponentide tuvastamiseks (isoleerimiseks)

Abimeetodid, mille eesmärk on tuvastada herpesviiruste antikehi bioloogilistes vedelikes, tuvastada ensümaatilisi nihkeid vereseerumis

Herpesviiruste eraldamine tundlikel raku- ja loomakultuuridel.
Otsene ja immuunne elektronmikroskoopia.
Immunoperoksidaasi meetodi otsesed ja kaudsed variandid. Fluorestsentssete antikehade meetodi otsesed ja kaudsed variandid.
Tahkefaasilise ensüümimmunoanalüüsi variandid.
Molekulaarse (DNA-DNA) hübridisatsioonimeetodi variandid.
Polümeraasi ahelreaktsioon.
Lateksi aglutinatsioonireaktsioon.

Neutralisatsioonitest
Komplemendi sidumise test
Lateksi aglutinatsioonitest
Fluorestsentsantikehade meetodi kaudne versioon
Immunoperoksidaasi meetodi kaudne versioon
Tahkefaasilise ensüümimmunoanalüüsi variandid
Immunoblot-meetod
Radiaalne komplemendi sidumise meetod
Alaniini ja aspartaadi aminotransferaasi taseme määramine

Nakkusliku mononukleoosi (EBV põhjustatud infektsioon) diagnoosimiseks kasutatakse seroloogilisi meetodeid. Paul-Bunnelli reaktsioon jäära punaste verelibledega, diagnostiline tiiter 1:28 või kõrgem ühe vereseerumi testis või antikehade 4-kordne suurenemine paariseerumite uurimisel. Kasutatakse Hoff-Baueri reaktsiooni 4% formaliseeritud hobuse punaste vereliblede suspensiooniga. Tulemust arvestatakse 2 minuti pärast; nakkusliku mononukleoosi korral on reaktsioon väga spetsiifiline.

Praegu töötatakse välja ensüümimmunoanalüüsi (EIA) meetodit nakkusliku mononukleoosi diagnoosimiseks. Sel juhul määratakse patsiendi seerumis IgG ja IgM antikehad, inkubeerides seda EBV-ga nakatunud lümfoblastidega, millele järgneb töötlemine fluorestseeruvate antikehadega. Haiguse ägedas perioodis määratakse viiruse kapsiidi antigeeni vastased antikehad tiitris 1:160 ja kõrgemal.

Mitmete imporditud kaubanduslike testimissüsteemide kasutamisel suudab ELISA tuvastada: EBV ümbrise antikehade vastaseid antikehi, EBV varajase antigeeni vastaseid antikehi, EBV varajase antigeeni vastaseid antikehi kokku, mis määratakse haiguse ägedas faasis nii tuumas kui ka raku tsütoplasmas, ja varajase EBV piiratud antikehi, mis määratakse haiguse ägedas faasis nii tuumas kui ka raku tsütoplasmas, EBV varajase antigeeni piiratud antikehi, mis määratakse haiguse haripunktis ainult raku tsütoplasmas, ja EBV tuumaantigeeni vastaseid antikehi. Nende testimissüsteemide kasutamine võimaldab diferentsiaaldiagnostikat paljude EBV-ga seotud haiguste puhul.

Pärast positiivset ELISA-testi, mis näitab EBV-vastaseid antikehi, viiakse läbi kinnitav immunoblotreaktsioon, mis määrab antikehade olemasolu üksikute EBV markervalkude (p-valkude) suhtes: p23, p54, p72 (selle valgu olemasolu näitab EBV paljunemise võimalust), p 138. Ülaltoodud laboratoorseid meetodeid kasutatakse ka ravi efektiivsuse jälgimiseks.

Viroloogiliste meetodite tundlikkus on 85–100%, spetsiifilisus 100%, uuringu kestus 2–5 päeva. Praktilises töös kasutatakse sageli otsese immunofluorestsentsmeetodi (DIF) kasutamist polüklonaalsete või monoklonaalsete antikehadega HSV-1 ja HSV-2 vastu. DIF-meetod on tavalises kliinilises laboris üsna kergesti korratav, ei ole kallis, tundlikkus on üle 80%, spetsiifilisus 90–95%. Immunofluorestsentsmikroskoopia abil tuvastati tsütoplasmaatiliste inklusioonide olemasolu, morfoloogilised tunnused, nakatunud rakkude protsent kusitist, emakakaelakanalist, emakakaelast ja pärasoolest võetud määrdproovides-kraapimises.

PIF-meetod annab ettekujutuse rakkude morfoloogilistest omadustest ja muutustest HSV antigeenide lokaliseerimises. Lisaks herpesviiruste põhjustatud rakkude kahjustuse otsestele tunnustele (spetsiifilise luminestsentsi tuvastamine) on PIF-andmete kohaselt ka kaudsed herpesinfektsiooni tunnused:

  • tuumaaine agregatsioon, karüolemma irdumine;
  • nn "augu" tuumade olemasolu, kui raku tuumast jääb alles ainult üks karüolemma;
  • tuumasiseste kaasamiste olemasolu - Cowdry kehad.

PIF-i läbiviimisel saab arst nakatunud rakkude seisundi kohta mitte ainult kvalitatiivse, vaid ka kvantitatiivse hinnangu, mida kasutasime atsükloviiriga (AC) viirusevastase ravi efektiivsuse hindamiseks. Seega uuriti PIF-meetodi abil dünaamikas 80 lihtsa genitaalherpesega (GH) patsienti. Näidati, et kui enne atsükloviiriga ravi oli 88%-l patsientidest määrdproovides kõrge nakatunud rakkude osakaal (50–75% ja rohkem), siis pärast ühte atsükloviiri kuuri avastati 44%-l patsientidest määrdproovides terveid rakke, 31%-l juhtudest täheldati üksikuid nakatunud rakke ja 25%-l patsientidest oli nakatunud rakke kuni 10%.

Nakatunud rakkude sisaldus atsükloviiriga ravitud genitaalherpesega patsientide määrdumisproovides (PIF-reaktsioon)

Haigusperioodid

Protsentuaalne sisaldus määrdumisproovides

Nakatunud rakud

Normaalsed
rakud

Rohkem kui
75%

50–75%

40–50%

10%

Üksikud rakud vaateväljas

Retsidiiv (enne ravi)

25%

63%

12%

(20)

(50)

(10)

Remissioon (pärast ravi)

25%

31%

44%

(20)

(25)

(35)

PIF-i ja punkthübridisatsioonimeetodit aastaid kasutades on täheldatud, et uuringu tulemused langevad kokku peaaegu 100% juhtudest. Tuleb märkida, et herpese diagnoosi usaldusväärsuse suurendamiseks, eriti herpese subkliiniliste ja madala manifestatsiooniga vormide korral, on soovitatav töös kasutada 2-3 laboratoorse diagnostika meetodit, eriti rasedate, ebasoodsa sünnitusajalooga naiste ja täpsustamata günekoloogilise diagnoosiga isikute uurimisel.

Seega on urogenitaaltrakti viiruslike ja bakteriaalsete infektsioonide PCR-diagnostikas vaja positiivseid tulemusi hinnata, võttes arvesse anamneesi, haiguse spetsiifiliste kliiniliste sümptomite olemasolu (või puudumist). Kui PCR-meetodil avastatakse klamüüdia, on sel juhul nakkuse tõenäosus suur ja ravi küsimused saab vastavalt lahendada. Mükoplasmade (ureaplasmade), mis on oportunistlikud mikroorganismid, avastamisel on diagnoosi kinnitamiseks vaja täiendavaid kultuuriuuringuid, st patsiendi materjali külvamist tundlikele rakukultuuridele. Ainult siis, kui kultuurianalüüsis saadakse positiivsed tulemused, saame rääkida mükoplasmoosi diagnoosi laboratoorsest kinnitusest. Sama meetod võimaldab vajadusel määrata isoleeritud mükoplasmade tundlikkust sageli kasutatavate ravimvormide (antibiootikumid, fluorokinoloonid jne) suhtes.

Võimalik on samaaegne nakatumine mitme Herpesviridae perekonna viirusega. Sageli tuvastasime ühel patsiendil nakatumise HSV-1, HSV-2 ja CMV viirustega. Patsiendid, kellel esinesid sekundaarse IDS kliinilised ja laboratoorsed ilmingud (onkohematoloogilised, onkoloogilised, HIV-nakkusega patsiendid), nakatusid oluliselt sagedamini mitme herpesviirusega. Seega on näidatud, et HIV-nakkuse korral progresseeruvate kliiniliste ja immunoloogiliste häiretega kaasneb molekulaarse hübridisatsioonimeetodi abil tuvastatud herpesviiruste arvu suurenemine. Sel juhul võib prognostiliselt kõige olulisemaks pidada HSV-1, CMV ja HHV-6 tüüpi DNA kompleksset samaaegset tuvastamist.

trusted-source[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]

You are reporting a typo in the following text:
Simply click the "Send typo report" button to complete the report. You can also include a comment.