Karyotüüpimine

Kromosoomide uurimiseks kasutatakse sageli lühiajalisi vere kultuure, samuti luuüdi rakke ja fibroblasti kultuure. Saadetakse laborisse verd antikoagulandi tsentrifuugiti sadestuma erütrotsüütide leukotsüüdid ja inkubeeriti kasvukeskkonda 2-3 päeva. Vereproovile lisatakse fütohemaglutiniini, kuna see kiirendab erütrotsüütide aglutinatsiooni ja stimuleerib lümfotsüütide jaotumist. Kromosoomide uurimiseks kõige sobivam faas on mitoosi metafaas, seetõttu kasutatakse lümfotsüütide jaotuse peatamiseks selles etapis kolhitsiini. Selle ravimi lisamine kultuurile suurendab metafaasi, st rakutsükli staadiumis olevate rakkude osakaalu, kui kromosoome on kõige paremini näha. Iga kromosoom dubleerib (toodab oma eksemplari) ja pärast asjakohast värvumist on nähtav kaks tsentromeerse või keskmise kitsendusega kinnitatud kromatiidi vormi. Seejärel töödeldakse rakke hüpotoonilise naatriumkloriidi lahusega, fikseeritakse ja värvitakse.

Kromosoomide värvimiseks kasutatakse sageli Romanovski-Giemsa värvainet, 2% atseetaminomiini või 2% atsetatsariini. Nad kleepivad kromosoome terviklikult, ühtlaselt (tavaline meetod) ja neid saab kasutada inimese kromosoomide arvuliste anomaaliate tuvastamiseks.

Et saada üksikasjalik ülevaade kromosoomide struktuurist, üksikute kromosoomide või nende segmentide identifitseerimiseks (määramiseks), kasutatakse erinevaid diferentsiaalse värvimise meetodeid. Kõige sagedamini kasutatavad meetodid on Giemsa, samuti G- ja Q-painutamine. Ravimi mikroskoopiline uurimine piki kromosoomi pikkust näitab värvitud (heterokromatiini) ja värvimata (euchromatiini) ribade seeriat. Antud juhul saadud püstjahvatuse iseloom võimaldab identifitseerida iga komplekti kromosoomi, kuna triipude vaheldumine ja nende suurused on iga paari puhul rangelt individuaalsed ja konstantsed.

Üksikute rakkude metafaasplaadid pildistatakse. Üksikud kromosoomid lõigatakse fotodest ja asetatakse paberilehele; sellist kromosoomide pilti nimetatakse karüotüübiks.

Täiendava värvimise kasutamine, samuti kromosoompreparaatide saamise uued meetodid, mis võimaldavad kromosoomide pikendamist pikendada, suurendavad märkimisväärselt tsütogeneetilise diagnostika täpsust.

Inimese karüotüübi kirjeldamiseks on välja töötatud spetsiaalne nomenklatuur. Mehe ja naise normaalne karüotüüp tähistatakse vastavalt 46, XY ja 46, XX. Downi sündroomis, mida iseloomustab täiendava kromosoomi 21 olemasolu (trisomüü 21), kirjeldatakse naiste karüotüüpi 47, XX 21+ ja mehed - 47, XY, 21+. Kromosoomi strukturaalse anomaalia esinemise korral on vaja näidata muudetud pikka või lühikest kätt: tähis p tähistab lühikest kätt, q pikk käsi ja t translokatsioon. Seega, kui kromosoomi 5 lühike käsi ("kassihirmu" sündroom) on eemaldatud, on naissoost karüotüüpi kirjeldatud kui 46, XX, 5p-. Tuleneva lapse ema Downi sündroom - 14/21 tasakaalustatud translokatsiooni kanduril on 45, XX, t (14q; 21q) karüotüüp. Kromosoomi translokatsioon tekib siis, kui kromosoom 14 ja 21 pikad käed ühinevad, lühikesed õlad kaovad.

Iga õlg jaguneb linnaosadeks ja need omakorda - segmentideks, ja need ja teised on tähistatud araabia numbritega. Kromosoomi tsentromeer on regioonide ja segmentide loendamise alguspunkt.

Seega kasutatakse nelja markerit kromosoomide topograafias: kromosoomi number, õla sümbol, piirkonna number ja segmendi number antud piirkonnas. Näiteks 6p21.3 rekord tähendab, et me räägime 6. Kromosoomi paari, selle lühikese arm, piirkond 21, segmendi 3. Seal on rohkem vabatahtlik märki, eriti pter - lõpuks lühikese õla, qter - lõpuks pika käe.

Tsütogeneetiline uurimismeetod võimaldab tuvastada kustutusi ja muid muudatusi kromosoomides ainult ligikaudu 1 miljoni aluse (nukleotiidid) suuruses.

[1], [2], [3], [4]