PCR kui geneetiliste haiguste diagnoosimise meetod
Viimati vaadatud: 23.04.2024
Kõik iLive'i sisu vaadatakse meditsiiniliselt läbi või seda kontrollitakse, et tagada võimalikult suur faktiline täpsus.
Meil on ranged allhanke juhised ja link ainult mainekate meediakanalite, akadeemiliste teadusasutuste ja võimaluse korral meditsiiniliselt vastastikuste eksperthinnangutega. Pange tähele, et sulgudes ([1], [2] jne) olevad numbrid on nende uuringute linkideks.
Kui tunnete, et mõni meie sisu on ebatäpne, aegunud või muul viisil küsitav, valige see ja vajutage Ctrl + Enter.
PCR on molekulaarsete geneetikate uus saavutus, mida kasutatakse DNA amplifikatsiooniks ja mis võimaldab DNA-i (st mis tahes huvipakkuva geeni) spetsiifilist osa, et seda in vitro kiiresti üle koperdada rohkem kui 200 000 korda. Reaktsiooni läbiviimiseks piisab, kui saadakse üks rakkude DNA-materjal; PCR-ga amplifitseeritud DNA kogus on nii suur, et seda DNA-d saab lihtsalt värvida (radioaktiivsete sondide kasutamine pärast elektroforeesi pole vajalik). PCR-i läbiviimise eeltingimus on amplifitseeritud DNA piirkonna nukleotiidjärjestuse teadmine kunstlikult sünteesitud praimerite õigeks valimiseks.
Praegu PCR on protsess, mis toimub ühe toru ja koosneb korduvatest võimendustsüklil (paljunemist, koopia) spetsiifiliste DNA järjestuste saamiseks piisavalt suur hulk koopiaid, mida võib eristab elektroforees. Üks põhikomponent reaktsioon - "praimereid" - sünteetilisi oligonukleotiide, kuhu kuuluvad 20-30 alustega komplementaarsete "Saidid" (pindalad) lõõmutus (ühendus) tuvastatava matriitsi osaga DNA.
PCR toimub automaatselt programmeeritavas termostaadis - termotsükleris (termotsükleris). Kolmeastmelist tsüklit, mille tulemusena saadakse malli DNA tuvastatava osa täpne koopia, korratakse 30-50 korda termotsükleri eelseadistatud programmis. Esimeses tsüklis hübridiseeruvad oligopramerid originaalse mall-DNA-ga ja seejärel (järgnevatel tsüklitel) ja äsja sünteesitud DNA-molekulidega, kui need kogunevad reaktsioonisegus. Viimasel juhul ei lõpe DNA DNA süntees termilise režiimi muutumise tõttu, vaid jõuab amplifitseeritud piirkonna DNA polümeraasi piirini, mis määrab kindlaks hiljuti sünteesitud DNA piirkonna suuruse ühe nukleotiidi sees.
Saadud DNA molekulide tuvastamise meetodina kasutatakse elektroforeesi, mille abil amplifitseeritud materjal jagatakse vastavalt amplikonite suurusele (amplifikatsiooniproduktid).
PCR abil on võimalik otseselt uurida kahtlustatavate mutatsioonide või polümorfsete saitide lokaliseerimise saite ja uurida ka DNA mis tahes muu eripära olemasolu.
[