Artikli meditsiiniline ekspert
Uued väljaanded
PCR kui geneetiliste haiguste diagnoosimise meetod
Viimati vaadatud: 04.07.2025
Kõik iLive'i sisu vaadatakse meditsiiniliselt läbi või seda kontrollitakse, et tagada võimalikult suur faktiline täpsus.
Meil on ranged allhanke juhised ja link ainult mainekate meediakanalite, akadeemiliste teadusasutuste ja võimaluse korral meditsiiniliselt vastastikuste eksperthinnangutega. Pange tähele, et sulgudes ([1], [2] jne) olevad numbrid on nende uuringute linkideks.
Kui tunnete, et mõni meie sisu on ebatäpne, aegunud või muul viisil küsitav, valige see ja vajutage Ctrl + Enter.
PCR on molekulaargeneetika uus saavutus, mida kasutatakse DNA amplifikatsiooniks ja mis võimaldab spetsiifilise DNA piirkonna (st mis tahes huvipakkuva geeni) kiiret in vitro paljundamist enam kui 200 000 korda. Reaktsiooni läbiviimiseks piisab ühest rakust pärinevast DNA materjalist; PCR-iga amplifitseeritud DNA hulk on nii suur, et seda DNA-d saab lihtsalt värvida (radioaktiivsete sondide kasutamine pärast elektroforeesi pole vajalik). PCR-i läbiviimise eeltingimuseks on amplifitseeritud DNA piirkonna nukleotiidjärjestuse tundmine kunstlikult sünteesitud praimerite õigeks valimiseks.
Praegu on PCR ühe katseklaasi protsess, mis koosneb korduvatest tsüklitest, mille käigus amplifikeeritakse (paljunemine, kopeerimine) spetsiifilist DNA molekuli järjestust, et saada piisavalt suur arv koopiaid, mida saab elektroforeesiga tuvastada. Üks reaktsiooni põhikomponente on "praimerid" - sünteetilised oligonukleotiidid, mis koosnevad 20-30 alusest, mis on komplementaarsed maatriks-DNA tuvastatud ala anniilimise (kinnitumise) "kohtade" (piirkondade) suhtes.
PCR toimub automaatselt programmeeritavas termostaadis - termotsükleris (võimendis). Kolmeastmelist tsüklit, mille tulemuseks on tuvastatud maatriks-DNA lõigu täpsed koopiad, korratakse 30-50 korda vastavalt määratud termotsükleri programmile. Esimeses tsüklis hübridiseeruvad oligopraimerid algse maatriks-DNA-ga ja seejärel (järgnevates tsüklites) äsjasünteesitud DNA molekulidega, kui need reaktsioonisegusse akumuleeruvad. Viimasel juhul ei lõpe DNA süntees temperatuuri muutuse tagajärjel, vaid amplifitseeritud lõigu DNA polümeraasi piiri saavutamisel, mis määrab äsjasünteesitud DNA lõigu suuruse ühe nukleotiidi täpsusega.
Saadud DNA molekulide tuvastamise meetodina kasutatakse elektroforeesi, mille abil eraldatakse amplifitseeritud materjal amplikonide (amplifikatsiooniproduktide) suuruse järgi.
PCR-i saab kasutada kahtlustatavate mutatsioonide või polümorfsete saitide asukohtade otseseks uurimiseks, samuti mis tahes muude spetsiifiliste DNA tunnuste olemasolu uurimiseks.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]