Artikli meditsiiniline ekspert
Uued väljaanded
Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) nakkushaiguste diagnoosimisel
Viimati vaadatud: 05.07.2025
Kõik iLive'i sisu vaadatakse meditsiiniliselt läbi või seda kontrollitakse, et tagada võimalikult suur faktiline täpsus.
Meil on ranged allhanke juhised ja link ainult mainekate meediakanalite, akadeemiliste teadusasutuste ja võimaluse korral meditsiiniliselt vastastikuste eksperthinnangutega. Pange tähele, et sulgudes ([1], [2] jne) olevad numbrid on nende uuringute linkideks.
Kui tunnete, et mõni meie sisu on ebatäpne, aegunud või muul viisil küsitav, valige see ja vajutage Ctrl + Enter.
PCR on üks DNA diagnostika meetoditest, mis võimaldab ensüümi DNA polümeraasi abil suurendada bakterite või viiruste genoomi (DNA) tuvastatud lõigu koopiate arvu miljoneid kordi. Antud genoomile spetsiifilise testitud nukleiinhappelõiku korrutatakse (amplifitseeritakse) mitu korda, mis võimaldab seda identifitseerida. Esmalt jagatakse bakterite või viiruste DNA molekul kuumutamise teel kaheks ahelaks, seejärel sünteesitud DNA praimerite juuresolekul (nukleotiidjärjestus on määratava genoomi spetsiifiline) seonduvad need komplementaarsete DNA lõikudega ja pärast iga praimerit sünteesitakse termostabiilse DNA polümeraasi juuresolekul teine nukleiinhappeahel. Saadakse kaks DNA molekuli. Protsessi korratakse mitu korda. Diagnostikaks piisab ühest DNA molekulist ehk ühest bakteri- või viiruseosakesest. Reaktsiooni täiendava etapi - DNA sünteesi RNA molekulil ensüümi pöördtranskriptaasi abil - lisamine võimaldas testida RNA viirusi, näiteks HCV viirust. PCR on kolmeastmeline protsess, mis kordub tsükliliselt: denatureerimine, praimeri anniilimine, DNA süntees (polümerisatsioon). Sünteesitud DNA kogus identifitseeritakse ELISA või elektroforeesi abil.
PCR-meetodil saab kasutada mitmesuguseid bioloogilisi materjale – vereseerumit või -plasmat, kusiti kraapimist, biopsiat, pleuravedelikku, tserebrospinaalvedelikku jne. PCR-meetodit kasutatakse peamiselt nakkushaiguste, näiteks viirushepatiit B, viirushepatiit C, viirushepatiit D, CMV-nakkuse, sugulisel teel levivate infektsioonide (gonorröa, klamüüdia, mükoplasma, ureaplasma infektsioonid), tuberkuloosi, HIV-nakkuse jne diagnoosimiseks.
PCR-i eelis nakkushaiguste diagnoosimisel teiste uurimismeetodite ees on järgmine:
- nakkustekitajat saab tuvastada mis tahes keha bioloogilises keskkonnas, sealhulgas biopsia käigus saadud materjalis;
- nakkushaigusi on võimalik diagnoosida haiguse varases staadiumis;
- uurimistulemusi on võimalik kvantitatiivselt hinnata (kui palju viirusi või baktereid uuritavas materjalis sisaldub);
- meetodi kõrge tundlikkus; näiteks PCR-i tundlikkus B-hepatiidi viiruse DNA tuvastamisel veres on 0,001 pg/ml (ligikaudu 4 × 10² koopiat /ml), samas kui hargnenud sondidega DNA hübridisatsioonimeetodi tundlikkus on 2,1 pg/ml (ligikaudu 7 × 10¹⁵ koopiat /ml).
[