Artikli meditsiiniline ekspert
Uued väljaanded
Restriktsioonifragmentide pikkuse polümorfismi analüüs
Viimati vaadatud: 05.07.2025
Kõik iLive'i sisu vaadatakse meditsiiniliselt läbi või seda kontrollitakse, et tagada võimalikult suur faktiline täpsus.
Meil on ranged allhanke juhised ja link ainult mainekate meediakanalite, akadeemiliste teadusasutuste ja võimaluse korral meditsiiniliselt vastastikuste eksperthinnangutega. Pange tähele, et sulgudes ([1], [2] jne) olevad numbrid on nende uuringute linkideks.
Kui tunnete, et mõni meie sisu on ebatäpne, aegunud või muul viisil küsitav, valige see ja vajutage Ctrl + Enter.
Kromosomaalse DNA analüüsimiseks mitmesuguste restriktsiooniendonukleaaside laialdane kasutamine on paljastanud inimese genoomi tohutu varieeruvuse. Isegi väikesed muutused struktuurgeenide kodeerivates ja regulatiivsetes piirkondades võivad viia teatud valgu sünteesi lakkamiseni või selle funktsiooni kadumiseni inimkehas, mis tavaliselt mõjutab patsiendi fenotüüpi. Siiski koosneb ligikaudu 90% inimese genoomist mittekodeerivatest järjestustest, mis on varieeruvamad ja sisaldavad palju nn neutraalseid mutatsioone ehk polümorfisme ning millel puudub fenotüübiline ekspressioon. Selliseid polümorfseid piirkondi (lookusi) kasutatakse pärilike haiguste diagnoosimisel geneetiliste markeritena. Polümorfsed lookused esinevad kõigis kromosoomides ja on seotud geeni kindla piirkonnaga. Polümorfse lookuse lokaliseerimise määramise abil on võimalik kindlaks teha, milline geen on seotud mutatsiooniga, mis põhjustas patsiendil haiguse.
Polümorfsete DNA piirkondade isoleerimiseks kasutatakse bakteriaalseid ensüüme - restriktaase, mille produktiks on restriktsioonisaidid. Polümorfsetes kohtades esinevad spontaansed mutatsioonid muudavad need resistentseks või vastupidi tundlikuks konkreetse restriktaasi toime suhtes.
Restriktsioonisaitide mutatsioonilist varieeruvust saab tuvastada DNA restriktsioonifragmentide pikkuse muutmise teel, eraldades need elektroforeesi abil ja seejärel hübridiseerides spetsiifiliste DNA-sondidega. Polümorfse saidi restriktsiooni puudumisel tuvastatakse elektroforeesil üks suur fragment ja selle juuresolekul väiksem fragment. Restriktsioonisaidi olemasolu või puudumine homoloogsete kromosoomide identsetes lookustes võimaldab mutantse ja normaalse geeni üsna usaldusväärset märgistamist ja selle ülekande jälgimist järglastele. Seega, kui uuritakse patsientide DNA-d mõlemas kromosoomis, mille restriktsioonisait asub polümorfses piirkonnas, tuvastatakse elektroforeesil lühikesed DNA fragmendid. Patsientidel, kes on homosügootsed polümorfset restriktsioonisaiti muutva mutatsiooni suhtes, tuvastatakse pikemad fragmendid ja heterosügootsetel patsientidel lühikesed ja pikad fragmendid.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]