Hemoblastooside immunofenotüpiseerimine

Märkimisväärseid edusamme hematoloogilise uuringud seotud viimastel aastatel kasutada kaasaegseid immunoloogilised meetodid ja automatiseeritud tööriistad analüüsimiseks ja sorteerimine rakud perifeerse vere ja luuüdi - voolutsütomeetrid. Traditsioonilised morfoloogilised ja tsütokemikaalseks uuring substraadile raku haiguse (veri, punane luuüdi, lümfisõlmed, põrn jne), mis paljudel juhtudel, eriti lümfoproliferatiivsest haigused, ei avalda kogu valikuvõimalusi seas morfoloogiliselt sarnased vormid ja päritolu tuvastamiseks patoloogiliseks kloon . Neid probleeme saab lahendada vaid uurides rakkude immunoloogilisi omadusi. Iga etapi diferentseerumist vereloomerakkudes on omad antigeene, mis oli rahvusvaheline klassifikaator tuntakse diferentseerumist ja diferentseerumist jagunevad klastrid, mida tähistatakse CD.

Blokis diferentseerumise kasvajaliste muutused võivad esineda mis tahes etapis normaalse raku arengu tulemusena patoloogilise rakuklooni määratledes substraati ravimiseks ja millel sama immunoloogilised (või fenotüübiline) omadus. Pärast uuringut nende markerite rakkudes võib määrata mis tahes vormis või teostuses haiguse on järjepidevad, st tuginedes immunoloogiline rakufenotüübi diferentsiaaldiagnoosimist, mis on kõige raskem lümfoproliferatiivsete häirete sest peamine rakusubstraadist patoloogiliste haigused on peaaegu sama tüüpi rakkudes morfoloogiliselt.

Fenotüpiseerimine lahtrisse monoklonaalsete antikehade abil iseloomustab blastiline rakud ja küpse müeloidse veri, mono-, lümfotsüütiline seeria juuresolekul diferentseerimisantigeenid (retseptoritega) rakuseina. Jaotises "Organismi immuunseisundi hindamine" kirjeldatakse osaliselt rakumarkerite omadusi ja diagnostilist tähtsust; Allpool on lühike kirjeldus hemobilootilisele diagnoosile rakendatud antigeensete rakumarkerite kohta. Vere- ja punase luu membraanide korral võib identifitseerida järgmisi antigeene (markereid).

• CD2 on monomeerne transmembraanne glükoproteiin. See esineb kõigi ringlevate T-lümfotsüütide ja mõnede NK-lümfotsüütide pinnal. CD2 osaleb T-lümfotsüütide alternatiivse aktiveerimise protsessis. CD2 monoklonaalsete antikehade tuvastamiseks kliinilises praktikas kasutatakse ägedate T-rakuliste leukeemiate, lümfoomide, krooniliste põletikuliste ja immunodefitsiitide fenotüübi määramist.
• CD3 - antigeenispetsiifilise T-raku retseptoriga seotud valkkompleks on T-lümfotsüütide peamine funktsionaalne marker. See hõlbustab aktiveerimissignaali ülekandmist membraanilt rakkude tsütoplasmasse. CD3 tuvastamine on näidustatud ägeda T-rakulise leukeemia, lümfoomi (CD3 ei ekspresseeritud mitte-T-rakuliste lümfoidsete kasvajate) ja immuunpuudulikkuse haiguste diagnoosimisel.
• CD4 - glükovalgu väljendatud alagrupis T abistaja (induktiivpoolid) moodustava 45% perifeerse vere lümfotsüütides. Algjärgus lümfotsüütide arengu tüümuses, CD4 antigeene, samuti CD8 väljendatuna kõik ajukoore lümfotsüüdid. Medullaarsed tümotsüütides, mis on sarnane fenotüüp küpse CD4 + perifeerse vere T-rakud (abistaja T-rakud), kas juba väljendada CD4 või CD8 retseptoreid. Perifeerses veres märgistatakse kuni 5% rakkudest samaaegselt CD4 ja CD8-ga. Mõnel monotsüütide rakul on võimalik CD4-i kerge ekspressioon. CD4 väljendatakse enamasti T-rakuline lümfoom, sealhulgas seentõve ja HTLV-seotud T-raku leukeemia (HTLV - inimese T-lümfotroopse viirusega - Human T-lümfotroopse viirusega).
• CD5 - üheahelaline glükoproteiin, mis esineb kõigil küpsetel T-lümfotsüütidel ja enamikul tümotsüütidel, avaldub B-lümfotsüütide poolt nõrgalt. CD5 tuvastatakse B-rakulise kroonilise lümfotsütaarse leukeemia ja tsentrütmilise lümfoomi neoplastilistes rakkudes. Teiste pahaloomuliste lümfoidsete haiguste - follikulaarne lümfoom, karvrakuline leukeemia, suurrakuline lümfoom - CD5 ei ekspresseeritud.
• CD7 on üheahelaline valk, mis on T-rakkude diferentseerumise varaseim marker. Seda ekspresseeritakse pro-T-lümfotsüütide poolt enne, kui nad migreeruvad harknääre. CD7 avastatakse enamikes NK-rakkudes, monotsüütidele on täheldatud nõrka ekspressiooni. B-lümfotsüüdid ja granulotsüüdid ei sisalda seda antigeeni. CD7 määratlust kasutatakse lümfoomide, laste T-rakulise lümfoblastilise leukeemia diagnoosimiseks.
• CD8 on valk, mis koosneb kahest disulfiidsildadega ühendatud polüpeptiidahelatest. Seda väljendab tsütotoksiliste ja suppressor-T-lümfotsüütide alampopulatsioon, mis sisaldavad 20-35% perifeerse vere lümfotsüüte. See antigeenil on ka NK-lümfotsüüdid, kortikaalsed tümotsüüdid, 30% medullaarseid tümotsüüte ja punaste luuüdirakkude alampopulatsioon. CD8-d uuritakse T-supressori sisalduse kvantitatiivseks hindamiseks (vt jaotist "T-lümfotsüütide supressorid veres").

• CD10 on rakumembraaniga seotud endopeptidaas. CD10 väljendab B-lümfotsüütide ja kortikaalsete lümfotsüütide alampopulatsiooni noorvorme. CD10 ekspresseerivad kõiki ALL-i rakke.
• CD11c ekspressioon makrofaagid, monotsüüdid, granulotsüüdid, NK-rakud ja karvrakulise leukeemia rakud rakumembraanis.
• CD13 - glükoproteiin rakkudes ekspresseeritud müelomonotsütaarsete seeria (eellasrakud, neutrofiilid, basofiile, eosinofiilid, monotsüüdid ja rakkude müeloidse leukeemia). See puudub T- ja B-lümfotsüütidel, erütrotsüütidel ja trombotsüütidel.
• CD14 on pinnamembraani glükoproteiin. Seda väljendavad peamiselt monotsüüdid ja makrofaagid. CD14 on tuvastatud perifeerse vere ja luuüdi üle 95% monotsüütides. Akuutse müeloblastilise leukeemiaga täheldatakse CD14 tugevat ekspressiooni. Ägeda ja kroonilise lümfoblastilise leukeemia korral ei avaldata seda antigeeni.
• CD15 on oligosahhariid. Ta osaleb fagotsütoosi ja kemotaksise protsessis. See antigeen esineb küpsete granulotsüütide ja Berezovsky-Sternbergi rakkude pinnal. Hodgkini tõbe detekteeritakse CD15 antigeeni ekspressioon. Mitte-Hodgkini lümfoomides ei avasta CD15 enamikul juhtudel.
• CD16 ekspresseerub granulotsüütide, monotsüütide, makrofaagide ja NK-rakkude pinnal. Kõik selle antigeeni ekspresseerivad lümfotsüüdid on võimelised antikeha-sõltuvaks rakuliseks tsütotoksilisuseks. CD16 määratakse, kirjutades kroonilise müelotsüütilise leukeemia, et iseloomustada NK-rakke.
• CD19 on glükoproteiin, mis esineb kõigil perifeersetes B-lümfotsüütides, samuti kõigil B-rakkude prekursoritel. See puudub plasmaprakkudes. See on kõige varem B-rakkude marker, mis mängib olulist rolli B-lümfotsüütide aktiveerimise ja proliferatsiooni reguleerimisel. CD19 ekspresseeritakse kõigi B-rakulise päritoluga ägeda leukeemia neoplastilistes rakkudes ja esineb ka mõnes ägeda monoblasti leukeemia vormis.
• CD20 on mitteglükosüleeritud valk. Ontogeny B-lümfotsüüdid CD20 antigeeni CD19 ilmub pärast etappi pre-B-raku lümfotsüüdi diferentseerumist. See puudub plasmarakkude plasmamembraanil. Seda ekspresseeritakse ALL, B-rakulise kroonilise lümfotsütaarse leukeemia, karvrakkude leukeemia, Burkitti lümfoomi ja väga harva akuutse monoblasti leukeemiaga.
• CD21 on glükoproteiin, märkimisväärses koguses esineb B-lümfotsüütides lümfoidorganites ja vähesel määral perifeerse vere B-rakkudes. CD21 on Epsteini-Barri viiruse retseptor.
• CD22 on valk, mis koosneb kahest polüpeptiidahelast. Seda ekspresseeritakse enamiku B-lümfotsüütide, sealhulgas eellasrakkude (prolümfotsüütide) membraanis. Antigeeni ei ekspresseeri B-lümfotsüütidel (plasmarakud) pärast nende aktiveerimist. Kõige selgemini ekspressioon CD22-de tuvastatakse karvrakulise leukeemia rakkudes, nõrk - müeloidsete leukeemiate ja mitte-T-rakkude ALL-is.
• CD23 on glükoproteiin, mida väljendatakse perifeerse vere aktiveeritud B-lümfotsüütidega palju suuremas ulatuses. CD23 vahendab IgE-sõltuvat tsütotoksilisust ja fagotsütoosi makrofaagide ja eosinofiilide poolt.
• CD25 on üheahelaline glükoproteiin, mis on identifitseeritud IL-2 madala afiinsusega retseptorina. Seda retseptorit ekspresseeritakse aktiveeritud T-lümfotsüütidel ja väiksema tihedusega aktiveeritud B-rakkudel. Tervete inimeste perifeerses veres esineb antigeen enam kui 5% ulatuses lümfoidrakkudest.
• CD29 on fibronektiini retseptor. Kudedes on see laialt levinud, seda väljendab leukotsüüte. CD34-de tuvastamiseks perifeersetes vererakkudes kasutatakse tüüpilist CD4 + CD29 + -fenotüübiga T-rakkude subpopulatsiooni, mida kutsutakse tüüp 2 helperiks (Th2). Need rakud lümfokiinide tootmise kaudu osalevad humoraalse immuunvastuse realiseerimises.
• CD33 on transmembraanne glükoproteiin. See esineb müeloidsete ja monotsüütide seeriate rakkude pinnal. Seda leitakse monotsüütide pinnal ja vähemal määral perifeerse vere granulotsüütidel. Ligikaudu 30% punastest luuüdi rakkudest ekspresseerivad CD33-d, sealhulgas müeloblaste, promüelotsüüte ja müelotsüüte. Pluripotentsete tüvirakkude membraanidel puudub antigeen. CD33-d kasutatakse rakkude iseloomustamiseks müeloidsete leukeemiate korral. Lümfoidse ja erütroidi päritoluga leukeemia rakud ei ekspresseeri CD33-d.
• CD34 on fosfoglükoproteiin, mida ekspresseerivad hematopoeetilised eellasrakud, sealhulgas monoteraapilised tüvirakud. Esimeste eellasrakkude puhul esineb kõige arusaadavam Ar avaldus; kui rakud küpsevad, langeb markeri ekspressioon. CD34 leidub ka endoteelirakkudes. CD34-d kasutatakse akuutse müelogeense ja lümfoblastilise leukeemia rakkude iseloomustamiseks. Kroonilise lümfotsütaarse leukeemia ja lümfoomiga ei tuvastata CD34 antigeeni ekspressiooni.

• CD41a ekspresseerib trombotsüüte ja megakarüotsüüte. Megakarioblastilise leukeemia diagnoosimiseks kasutatakse CD41a tuvastamiseks monokloonseid antikehi. Glązmanni trombastheniaga puudub selle antigeeni ekspressioon või see on oluliselt alla surutud.
• CD42b on membraani glükoproteiin, mis koosneb kahest polüpeptiidahelast. Marker paikneb trombotsüütide ja megakarüotsüütide pinnal. Kliinilises praktikas kasutatakse CD42b tuvastamist trombotsütopeenia - Bernard-Soulier'i sündroomi diagnoosimiseks.
• CD45RA kuulub transmembraansete glükovalkude klassi. See on leukotsüütide tavaline antigeen. See avaldub B-lümfotsüütide rakumembraanile, vähemal määral T-lümfotsüütidele ja küpsetele medullaarsetele tümotsüütidele. Markerit ei ekspresseeri granulotsüüdid.
• CD45RO on CD45RA madala molekulmassiga isovorm - tavaline leukotsüütide Ag. Neid leidub T-rakkudes (mälu T-lümfotsüüdid), B-lümfotsüütide, monotsüütide ja makrofaagide subpopulatsioonides. CD45RO monoklonaalsed antikehad interakteeruvad enamike tümotsüütidega, puhkevate CD4 + ja CD8 + T-lümfotsüütide ja täiskasvanud aktiveeritud T-rakkude alampopulatsiooniga. See antigeen kannab ka müelomonotsüütide päritolu rakke, granulotsüüte ja monotsüüte. See avastatakse tsentroblastis ja immunoblastses lümfoomis.
• CD46-O-glükosüülitud dimeer. See on laialt levinud kudedes ja väljendati T- ja B-lümfotsüüdid, monotsüüdid, granulotsüüdid, NK-rakud, vereliistakud, endoteelirakkude, fibroblastid, kuid puudub pinnal erütrotsüütidega. CD46 pakub koe kaitset täiendava toime eest.
• CD61 on trombotsüütide antigeen. Seda ekspresseeritakse perifeersete vereliste vereliistakute ja punase luuüdi, samuti megakarüotsüütide ja megakarioblastide vereloones. Selle definitsiooni kasutatakse akuutse megakariooblastilise leukeemia markerina. Glanzmanni trombastaniast põhjustatud patsientide antigeeni ekspressioon puudub või pärssitakse.
• CD95, mida nimetatakse ka Fas või APO-1, on transmembraanne glükoproteiin, mis on tuumori nekroosifaktori retseptorite perekonna liige. Seda väljendatakse märkimisväärses koguses T-lümfotsüütide perifeerses veres (CD4 + ja CD8 +) ning vähemal määral B-lümfotsüütidel ja NK-rakkudel. Seda antigeeni ekspresseeritakse ka granulotsüütide, monotsüütide, koe-rakkude ja neoplastiliste rakkude suhtes. CD95 seondumine Fas-ligandiga (CD95L) indutseerib rakkudes apoptoosi.
• CD95L või Fas-ligand, kasvaja nekroosifaktori retseptorite perekonna kuuluv membraanivalk. Seda antigeeni ekspresseerivad tsütotoksilised T-lümfotsüüdid, NK-rakud ja väga sageli kasvajarakud; rakkude apoptoosi peamine indutseerija.
• HLA-DR on inimese peamise inimese histoloogilise kokkusobimatuse kompleksi (HLA) klassi II molekulide monomorphic determinant. Markerit väljendatakse Langerhansi rakkudes, lümfoidsete elundite dendriitrakkudes, teatud tüüpi makrofaagides, B-lümfotsüütides, aktiveeritud T-rakkudes ja tüümuse epiteelirakkudes. Seda markerit testitakse, et mõõta aktiveeritud T-lümfotsüüte fenotüübiga CD3 + HLA-DR +.

Markerite monoklonaalsete antikehade erineva valiku abil on võimalik teatud tüüpi leukeemia jaoks iseloomulike rakkude fenotüüpiline portree.

Pealegi lehe immunofenotüüpimine tehnikaid diagnoosiks ja eristusdiagnoosiks hematoloogiliste pahaloomuliste kasvajate, eriti tähtis välja nende kasutamist raviprotsessi hinnata seisundi paranemise ja järelejäänud populatsioon leukeemiarakkudesse. Teades fenotüübilise "portrait" kohta blastrakud ajavahemikul diagnoosi, et nende markerite ta suudab leida raku leukomeelisi kloonist vähendamine ning sellest, et suureneb nende arv - arenemise ennustamiseks retsidiivide pikk (1-4 kuud), kuni selle kliiniliste ja morfoloogilised tunnused.

[1], [2], [3], [4],