Konfokaalne mikroskoopia

Konfokaalset mikroskoopiat peetakse praegu üheks paljulubavamaks meetodiks in vivo naha pildistamiseks, mistõttu on huvi selle vastu nii arstide kui ka uurimisinstituutide esindajate seas ebatavaliselt suur.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Konfokaalse mikroskoopia võimalused

Dermatoloogias kasutatakse konfokaalset lasermikroskoopiat järgmistel juhtudel:

• ühendite naha läbitungimise uurimine (penetratsiooniteed, kineetika, jaotumine nahas);
• näärmete toimimise jälgimine (aktiivse ja passiivse seisundi määramine);
• mikrotsirkulatsiooni voodi uuringud (sh reaalajas);
• Neoplasmide diagnostika.

Ilma ülalmainitud konfokaalse mikroskoopia tüüpide eeliseid ja puudusi arutamata märgime, et viimastel aastatel on fluorestsentslaser-konfokaalne mikroskoopia muutunud üha populaarsemaks.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokaalne mikroskoopia naha uurimiseks

Konfokaalmikroskoop pakub kahte hindamatut võimalust - kudede uurimist rakulisel tasandil füsioloogilise elutegevuse seisundis ja uuringu tulemuste (st rakulise aktiivsuse) demonstreerimist neljas dimensioonis - kõrgus, laius, sügavus ja aeg. Kujutise kvaliteedi ja uuringu sügavuse seisukohalt mängib kõige olulisemat rolli koe võime valgust läbi lasta ehk teisisõnu selle läbipaistvus. Konfokaalmikroskoopia meetod on kontaktivaba, valguskiir ei põhjusta uuritavale patsiendile ega katseloomale mingit kahju ega ebamugavust.

Naha uurimiseks kasutatakse konfokaalset skaneerivat lasermikroskoopiat (CSLM). See meetod võimaldab näha epidermist ja dermise papillaarset kihti histoloogilisele lähedase lahutusvõimega. Kõik uuringutulemused kuvatakse monitoril ja salvestatakse pildifailide paketina (mikrofilmina (dünaamikas) või mikrofotodena).

Meetodit on kahte tüüpi:

• peegeldav (peegeldusvõime CSLM) - põhineb asjaolul, et erinevatel rakusisestel ja rakkudevahelistel struktuuridel on erinevad valguse murdumisnäitajad, mis võimaldab saada kontrastset pilti.
• fluorestsents (fluorestsents CSLM) - kasutab laservalgust, mis tungib läbi naha ja ergastab selles ekso- või endokromofoore, mis vastuseks hakkavad kiirgama footoneid (st fluorestseeruma).

Külgresolutsioon on minimaalne kaugus punktide vahel, mis asuvad horisontaaltasapinnal, st nahapinnaga paralleelsel tasapinnal. Aksiaalne resolutsioon on minimaalne kaugus punktide vahel, mis asuvad nahapinnaga risti oleval tasapinnal.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Konfokaalse mikroskoopia ajalugu

Ideed luua mikroskoop, mis suudaks näidata eluskoe osa rakulisel tasandil, arendati aktiivselt 130 aastat tagasi. Tänapäevaste mikroskoopide põhielement konstrueeriti 19. sajandi lõpus ja see oli pöörlev ketas, mille pisikesed augud olid spiraalselt paigutatud. Selle ketta leiutas 1883. aastal saksa tudeng Paul Nipkow, kelle järgi see nime sai - Nipkowi ketas. Leiutis põhines valguse võimel, läbides ketta pisikesi auke ja luupi, tungida sügavale koesse ja valgustada pinnast kaugel asuvat rakufragmenti. Kui ketas pöörleb kiiresti, moodustavad fragmendid ühtse pildi. Struktuuri objektist eemale või lähemale liigutades on võimalik muuta uuritava koe optilise osa sügavust.

Alles videomagnetofonide tulekuga 1980. aastatel ja piltide töötlemiseks võimeliste arvutite tulekuga 1990. aastate alguses sai võimalikuks luua ja tõhusalt kasutada tänapäevaseid mikroskoope, mida tänapäeval kasutatakse.