A -hepatiidi viirus

Viiruse hepatiit A on inimese nakkushaigus, mida iseloomustab ülekaalus maksakahjustus ja kliiniline mürgistus ja kollatõbi. A-hepatiidi viirus avastati 1973. Aastal S. Feinstone (ja teised), kasutades immuun-elektronmikroskoopia meetodit ja nakatades ahve - šimpanse ja marmosette. Immuun-elektronmikroskoopia meetodi olemus on see, et hepatiit A patsiendil väljaheidete filtraadile lisatakse spetsiifilisi antikehi (rekonstruktsiooniga seerumit) ja sadet töödeldakse elektronmikroskoopia abil. Spetsiifiliste antikehade viiruste vastastikmõju tõttu toimub nende spetsiifiline agregeerimine. Sellisel juhul on neid lihtsam tuvastada ja antikehade mõju agregeerides kinnitab patogeeni spetsiifilisust. S. Feinstone avastamist kinnitasid vabatahtlike eksperimendid.

Hepatiit A viirus on sfäärilise kujuga, virioni läbimõõt on 27 nm. Genoomi esindab üheahelaline positiivne RNA, mille mass on 2,6 MD. Supercapsid puudub. Sümmeetria tüüp on kubik - ikoasadroon. Kaptsiidil on 32 kapsomeeri, selle moodustavad neli polüpeptiidi (VP1-VP4). Oma omaduste tõttu kuulub A-hepatiidi viirus perekonda Heparnovirus, perekond Picornaviridae. Antigeenselt on hepatiit A viirus (HAV-hepatiidi A viirus) homogeenne. HAV korrutab hästi ka šimpanside kehas, paavianites, hamadrüülides ja hasartmängulahtides (marmosetid). Pikemat aega ei saanud viirus kasvatada. Ainult 1980ndatel. Oli võimalik saada rakukultuure, milles HAV levib. Esialgu kasutada nimetatud eesmärkidel, surematuks embrüo neeru rakuliini reesusmakaagi (kultuuri FRhK-4), ja nüüd - siirdatud neeru rakuliin rohelise ahvi (Kultuur 4647).

Vastavalt WHO ekspertide soovitustele võeti vastu järgmine A-hepatiidi markerite nomenklatuur: hepatiit A viirus-NAU antikehad hepatiit A viirusele: anti-NAV IgM ja anti-NAV IgG.

HAV on väikesed osakesed läbimõõduga 27-30 nm, millel on icosahedral sümmeetria ja millel on homogeensus. Immunogeereerimise meetodil saadud elektrondifraktogrammil tuvastatakse pinnapealselt asetsevate sümmeetriliselt paigutatud kapsomaaride elektron-tihedad osakesed. Negatiivse kontrastsusega tuvastatakse preparaatides nii täis kui tühjad osakesed. Nucleocapsid NAV, erinevalt gripi omadest, ei sisalda pinna eendusi ega membraane. Samuti on oluline, et virion HAV-il ei oleks südame-kujuline struktuur.

Vastavalt oma füüsikalis-keemiliste omaduste A-hepatiidi viirus on seotud perekonna Picornaviridae, perekonna enteroviiruselt aatomi number 72. Kuid see taksonoomia oli liiga ebatavaline, ja leidis WHO on võimalik lahkuda terminoloogia "A-hepatiidi viirus".

Nagu kõik perekonnast Picornaviridae kuuluvad viirused, sisaldab A-hepatiidi viirus ribonukleiinhapet. Mõned laborid on näidanud võimalust kloonida hepatiit A viiruse genoomi, mis avab võimaluse saada vaktsiinipreparaate.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

A-hepatiidi viiruse vastupanu

Viirus on suhteliselt vastupidav kõrgele temperatuurile, happed, rasvlahustite (lipiidid puuduvad), desinfektsioonivahendid, see talub madalat temperatuuri. Kõik see aitab kaasa pikaajalisele säilitamisele väliskeskkonnas. Toatemperatuuril säilib see mitme nädala jooksul, temperatuuril 60 ° C osaliselt kaob infektsioonivõime 4-12 tunni pärast, täielikult - mõne minuti pärast temperatuuril 85 ° C. Kloori suhtes väga vastupidav, mille tõttu on see veepuhastusjaamade tõkke abil tungida kraanivettesse.

Kõigi andmete kokkuvõtte saamiseks võib A-hepatiidi viirust iseloomustada järgmiselt:

• looduslik meister on mees;
• katseloomad - marmozet, šimpansid;
• nakkuse allikas - väljaheited;
• haigus - epideemia ja endeemiline;
• ülekandeliin on fekaal-oraalne;
• inkubatsiooniperiood - 14-40 päeva;
• üleminek kroonilisele hepatiidile - pole märgitud.

NAVi immunoloogilised omadused on järgmised:

• Prototüüpi tüved - MS-l, CR-326, GVG. Kõik on immunoloogiliselt sarnased või identsed;
• Antikehad - IgM ja IgG, toodetakse vastusena viiruse struktuursete valkude kasutamisele ja on kaitsvad;
• I Inimese seerumi y-globuliini troofiline toime - kaitseb või nõrgendab haigust manustamise tingimustes enne nakatamist või inkubeerimisperioodi jooksul.

NAU füüsikalis-keemilised omadused on järgmised:

• Morfoloogia on kubic sümmeetriaga mitte-kere sfääriline osake, kapsiid koosneb 32 kapsomeerist;
• Läbimõõt on 27-30 nm;
• Tihedus CsCl-is (g / cm3) on 1,38-1,46 (avatud osakesed), 1,33-1,34 (täiskasvanud virion), 1,29-1,31 (ebaküpsed virionid, tühjad osakesed);
• Settimiskoefitsient on 156-160 küpsed virionid;
• Nukleiinhape - üheahelaline lineaarne RNA;
• Suhteline molekulmass - 2,25 106-2,8 106KD;
• Nukleotiidide arv on 6500-8100.

NAV stabiilsus füüsikalis-keemiliste mõjude korral on järgmine:

• Kloroform, eeter - on stabiilne;
• Kloor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - osaline inaktiveerimine;
• Kloramiin, 1 g / l, 20 ° C, 15 minutit - täielik inaktiveerimine;
• Formaliin, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 tundi - täielik inaktiveerimine, 1: 350, 20 ° С, 60 min - osaline inaktiveerimine.

Temperatuur:

• 20-70 ° C - stabiilne;
• 56 ° С, 30 minutit - see on stabiilne;
• 60 ° С, 12 tundi - osaline inaktiveerimine;
• 85 ° С, 1 min - täielik inaktiveerimine;
• Autoklaavimine, 120 ° C 20 minutit - täielik inaktiveerimine;
• Kuiv kuumus, 180 ° C, 1 h - täielik inaktiveerimine;
• UV, 1,1 W, 1 min - täielik inaktiveerimine.

Esitatud andmed näitavad, et hepatiit A viiruse füüsikalis-keemilised omadused on enteroviiruste lähimateks. Nagu teised enteroviirused, on HAV ka paljudel desinfektsioonivahenditel, mis on täielikult inaktiveeritud mitu minutit temperatuuril 85 ° C ja autoklaavitud.

See tõestas, et A-hepatiidi viirus võib reprodutseerida esmane ja pidev monokihtkultuurides inimese rakuliine ja ahv. Eriti aktiivselt reproduktsiooni A-hepatiidi viiruse in vitro kultuuride täheldatakse lähtematerjalina väljavõtete maksa patsientide ahvidel. Siiski tuleb märkida, et kõigis katsetes vastavalt reproduktsiooni A-hepatiidi viiruse in vitro kultuuride tähelepanuväärne pikk peiteaeg esmane läbipääsud (-10 kuni 4 nädalat), seejärel kogunemine viiruse geneetilise materjali suureneb, kuid absoluutväärtused on väga alaealine, mis tekitab palju teadlasi rääkida mittetäieliku replikatsiooni A-hepatiidi viirus koekultuurid.

Kokkuvõtteks kirjanduse andmetel hepatiit A viiruse paljunemist mittejuurekultuuride kohta võib öelda, et HAV-i pikaajalisest kogemusest in vitro on vaieldamatu. Stabiilselt kõrge viiruse replikatsiooni taseme optimaalsed tingimused pole lõplikult kindlaks määratud ja see piirab tema bioloogiliste omaduste uurimist, diagnostikavahendite tootmisel kasutatavate reaktiivide allika tootmist ja vaktsiinide kujundamist.

Samal ajal leiab see kirjandusest selle probleemiga rohkem optimistlikke otsuseid. Kõigi A-hepatiidi viiruse kasvatamisega seotud probleemide lahendamine on lähitulevikus aktuaalne. Uurides optimaalsed HAV levimisel rakukultuuris embrüonaalse neeru reesusahvid paljastas kahes etapis: etapp nakkusliku viiruse tootmiseks (kuni 6-8 päeva hetkel 5. Läbipääsu) ja faasi intensiivse kuhjumine Viirusantigeeni. Samuti on näidatud, et viirusliku antigeeni kõige olulisem akumulatsioon toimub nn rullkultuuri tingimustes (pöörlevad pudelid). Nii avanevad suured võimalused kultuurilise antigeeni saamiseks suures koguses ja sellest tulenevalt ilmnevad diagnostikaseadmete valmistamise lähteained ja vaktsiinipreparaatide valmistamine.

A-hepatiidi epidemioloogia

Hepatiit A viirusel on inimestele kõrge patogeensus. Vastavalt Maailma Terviseorganisatsiooni (1987) järeldusele on haiguse ilmnemisel piisav ainult ühe virioni nakatamine. Kuid praktiline nakkuslik annus on ilmselt palju suurem. Nakatumise allikas on ainult nakatunud inimene. Viirus vabaneb suures koguses väljaheitega 12-14 päeva enne kollatõusu ilmnemist ja 3 nädala jooksul. Ikteriline periood. Ignüüsi, kollatõbi ja asümptomaatiliste A-hepatiidi viirusega patsientidel ei ole olulisi erinevusi patogeeni isoleerimises. Infektsiooni meetod on fekaal-oraalne, peamiselt vesilahus, samuti leibkonna- ja toidutrasside abil. Infektsiooni meetod on fekaal-oraalne, peamiselt vesilahus, samuti leibkonna- ja toidutrasside abil. Viiruse peamine (esmane) marsruut on vesi. Samuti on võimalik õhus nakatuda. Elanike vastuvõtlikkus on universaalne. Enamasti on alla 14-aastased lapsed haiged. Haigusel on selgesti sügis-talvel hooajalisus.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

A-hepatiidi sümptomid

Inkubatsiooniperiood varieerub vahemikus 15 kuni 50 päeva, mis sõltub viiruse nakatamiskogusest, kuid keskmiselt on see 28-30 päeva. Kui organismis, A-hepatiidi viiruse replitseerub regionaalsetesse lümfisõlmedesse, vereringesse ja seejärel maksarakud ja põhjustab hajus akuutne hepatiit, millega kaasnevad kahjustused maksa hepatotsüütides ja retikuloendoteliaalrakkude ning väheneb selle võõrutus ja barjäärifunktsiooni. Hepatotsüütide kahjustus ei toimu viiruse otsese toime tõttu, vaid immunopatoloogiliste mehhanismide tagajärjel. Kõige tüüpilisem pilt hepatiit A on akuutne icteric tsüklilise vormi: inkubatsiooniperioodi prodromaalses (preicteric), kollatõbi ja konvalestsents jooksul. Kuid koldeid infektsiooni paljastab suure hulga patsientide asümptomaatiline anicteric vormid infektsioon, mille arv võrreldes ülekaalus icteric ( "tipp fenomeni").

Postinfektsioosne immuunsus on tugev ja pikaajaline, põhjustatud viiruse neutraliseerivatest antikehadest ja immuunmälurakkudest.

A-hepatiidi mikrobioloogiline diagnoos

Diagnoos A-hepatiidi (va infektsiooni loomad - šimpansid marmozet, paavianid, mida me oleme), mis põhineb erinevate immunoloogiliste meetoditega: DGC immuunfluorestsents meetodi hemaglutineerumise immuunsüsteemi haardumisega (kompleks Viirusantigeeni + antikeha juuresolekul komplemendi adsorbeerunud erütrotsüütidel ja põhjustab nende haardumist) . Kuid rakendatavuse need meetodid on piiratud, kuna puuduvad konkreetsed viirusantigeenidega immunofluorestsentsanalüüsiga reaktsioon vajab maksabiopsiat, mis on ebasoovitav. Usaldusväärne ja konkreetne meetod on immuunsüsteemi elektronmikroskoopia, kuid see on väga aeganõudev. Seega, kuni ainus vastuvõetav meetod immunoloogilise reaktsiooni immunosorptsioonimeetodiga tahkele faasile vormis IPM või RIM, eriti modifikatsiooni "püüdmise" immunoglobuliin M. Meie riigis selleks ettepanek katsesüsteemi - "DIAG-A-GEO". Selle katsesüsteemi tööpõhimõte on järgmine. Seintele polüstüreeni lunochek sorbeeriksid esimese antikehade immunoglobuliinide klassi M (antiimmunoglobuliny M) lisatakse seejärel uuritud patsiendi seerumis. Kui on antikehade klassi IgM, nad seostuvad antikeha-Ti-M, siis lisatakse konkreetse viiruse antigeen (A-hepatiidi viirus), mis saadakse kasvav rakukultuuris. Süsteem loputatakse ja sellele lisatakse viirusevastase märgistatud antikehad mädarõika peroksidaas. Kui on olnud interaktsiooni kõik neli süsteemi komponendid on nelja kihi "sandwich":

• antiimmunoglobuliinid M
• immunoglobuliinid M (A-hepatiidi viiruse suhtes - patsiendi testi seerumis)
• viiruslik antigeen,
• viirusevastased antikehad, mis on märgistatud ensüümiga.

Selle kompleksi tuvastamiseks lisatakse lunettidele ensüümi substraat. Ensüümi mõju tõttu hävib see ja moodustub värvitud toode. Värvuse intensiivsust saab mõõta kvantitatiivselt spektrofotomeetriga või fotokoloriomeetriga.

IgM-i "kogumise" meetodi eeliseks on see, et selle klassi immunoglobuliinide antikehad esinevad primaarse immuunvastuse korral ja näitavad infektsiooni aktiivset staadiumi, mis pärast ülekantavat haigust kaovad . Vastupidi, IgG klassi kuuluvad viirusevastased antikehad püsivad pikka aega pärast haigust, tagades omandatud immuunsuse. Hepatiit A viiruse avastamiseks tehakse ettepanek DNA-proovide meetodi kohta: sondina kasutatakse täiendavat vRNA-sondit.

Hepatiit A ravi

Kuna viirusliku hepatiidi korral on interferooni tootmine häiritud, põhineb hepatiit A raviks interferooni ja selle amüksiini endogeense sünteesi indutseerija.

A-hepatiidi spetsiifiline ennetamine

Varem laialdaselt seroprevention hepatiit A, kasutades gammaglobuliin ei olnud õigustatud, aga rõhku pandi põllumajandusettevõtte immuniseerimist läbi vaktsineerimine A-hepatiidi. Sel eesmärgil töötatakse välja ja kasutatakse juba erinevaid vaktsiinivariante. Venemaal sai efektiivne vaktsiin A-hepatiidi vastu 1995. Aastal ja nüüd on seda edukalt rakendatud.