13c ureaasi test: ettevalmistus, tulemused, positiivne, negatiivne

Pärast kroonilise gastriidi ning mao- ja kaksteistsõrmiksoole haavanditega seotud Helicobacter pylori bakteri avastamist on välja töötatud diagnostilised meetodid, sealhulgas ureaasi test, mis võimaldab tuvastada neid mikroorganisme konkreetsel patsiendil, kinnitades nende osalemist seedetrakti haiguste tekkes ja määrates efektiivse ravi.

Ureaasi ensüüm kui Helicobacteri infektsiooni biomarker

H. pylori bakterid kaitsevad end mao valendikus oleva happelise keskkonna eest kahel viisil. Esiteks, kahjustades oma flagellidega limaskesta, jõuavad mikroorganismid selle alumistesse kihtidesse, otse epiteelirakkudeni, kus pH on kõrgem (st happesus on madalam). Teiseks neutraliseerivad bakterid happe, sünteesides suures koguses katalüütiliselt aktiivset kõrgmolekulaarset metalloensüümi ureaasi ehk uurea amidohüdrolaasi.

Ureaasi kasutamine Helicobacteri diagnoosimisel on võimalik mitte ainult selle ensüümi tsütoplasmaatilise aktiivsuse, vaid ka peremeesrakkudega suhtlemise välise interaktsiooni tõttu.

Ureaasi toimel toimub mao uurea lagunemine vesiniknitriidiks (ammoniaak) ja süsinikdioksiidiks (süsinikdioksiid). Need reageerivad maomahlas oleva vesinikkloriidhappega ja loovad H. pylori ümber neutraalse happesuse tsooni ning toetavad ka bakterirakkude ainevahetust.

Seepärast on ureaas inimese mao limaskestal H. pylori koloniseerimise kõige olulisem tegur ning ureolüütilise aktiivsuse tuvastamist peetakse selle bakteri virulentsuse biomarkeriks, mida gastroenteroloogid – ureaasi testi abil – kasutavad Helicobacteri infektsiooni diagnoosimiseks, samuti ravimite poolt indutseeritud bakterite hävitamise (eradikatsiooni) tulemuste jälgimiseks.

H. pylori diagnostika hõlmab invasiivseid ja mitte-invasiivseid teste – olenevalt sellest, kas on vaja mao endoskoopilist uuringut (fibrogastroduodenoskoopia) või mitte. Invasiivne test on kiirureaasi test ehk ekspress-ureaasi test (RUT-test), mis nõuab koeproovide võtmist (biopsia). 13C-uurea hingamistest (13C-UBT) on kõige levinum mitte-invasiivne test.

Tuleb märkida, et H.pylori mitteinvasiivset diagnostikat saab teha antikehade vereanalüüsi abil (spetsiifilisus 75%, tundlikkus - 84%), uriini ELISA abil (tundlikkusega 96% ja spetsiifilisusega 79%) ja bakteriaalsete antigeenide koprogrammi abil. Lisateavet leiate Helicobacter pylori infektsioonist: Helicobacter pylori antikehad veres.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Menetluse tähised ureaasi test

Mao limaskesta koloniseerimine H. pylori poolt iseenesest ei ole haigus, vaid see on organismi bakteriaalse koormuse suurenemise tegur, mis teatud tingimustel võib vallandada mao ja ülemise seedetrakti mitmete patoloogiate arengut.

Helicobacteri infektsiooni diagnostika näidustused, eriti ureaasi test, on seotud suurenenud happesusega gastriidi, antraal- ja atroofilise gastriidi, duodeniitiga, mao- ja kaksteistsõrmiksoole haavandiga ning mao MALT-lümfoomiga. Pärast varajases staadiumis maovähi endoskoopilist resektsiooni saab histoloogilise uuringu läbi viia koos ureaasi kiirtestiga - FGDS ureaasi testiga.

Gastroenteroloogid võivad määrata ureaasi testi, kui patsiendid kurdavad raskustunnet ja ebamugavustunnet epigastimaalses piirkonnas, sagedast kõrvetisi pärast söömist, hapu või mädanenud röhitsemist, kibedust suus, iiveldust, soolehäireid, valutavat või kramplikku valu maos.

[ 8 ], [ 9 ]

Ettevalmistus

13C uurea hingamistesti ettevalmistus seisneb patsiendi lõpetamises: antibiootikumide võtmise 4 nädalat enne testi ja MSPVA-de, prootonpumba inhibiitorite (mao happesuse vähendamiseks) ja kõrvetiste korral kasutatavate antatsiidide või adsorbentide võtmise - vähemalt kaks nädalat enne testi. Mis tahes ravimite võtmine tuleks lõpetada viis kuni kuus päeva ning alkoholi joomine ja suitsetamine - kolm päeva enne testi.

Samuti on soovitatav umbes nädal enne testimist vältida kaunviljade söömist, kuna oad, herned, läätsed, sojaoad ja oad sisaldavad ureaasi (mis kaitseb taimi haiguste ja putukakahjurite eest).

Testi eelõhtul on hiline ja rikkalik õhtusöök vastunäidustatud; testi päeval tuleks teha tavalist suuhügieeni ning poolteist tundi enne testi ei tohiks midagi juua ega nätsu kasutada.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tehnika ureaasi test

Rakendustehnika:

• Esmalt võetakse hingamisproov – väljahingamine tehakse pehmesse plastmahutisse (ja suletakse hermeetiliselt);
• 13C-uurea lisandiga vedelikku võetakse suu kaudu;
• 25-30 minuti pärast võetakse teine väljahingatava õhu proov teise anumasse.

Sel viisil saadud proove analüüsitakse massispektromeetril, eraldades teises proovis isotoope ja määrates nende kontsentratsiooni. Teise ja esimese proovi väärtuste erinevust väljendatakse delta (δ) abil võrreldes baastasemega. Normaalväärtused, st märgistatud aatomi 13C negatiivsed väärtused nakatumata patsientidel varieeruvad vahemikus 0,15–0,46% ja positiivsed väärtused nakkuse korral on 1,2–9,5%, uurea hüdrolüüsi kiirusega üle 12–14 μg/min.

Lihtsamalt öeldes: 13C-märgistatud süsinikdioksiidi tuvastamine väljahingatavas õhus näitab, et ureaasensüüm H. pylori on karbamiidi hüdrolüüsinud, mis tegelikult kinnitab selle olemasolu maos.

H. pylori hingamistest

Helicobacter pylori tuvastamiseks mõeldud 13C-UBT test ehk 13C uurea hingamistest on üks olulisemaid mitteinvasiivseid meetodeid selle infektsiooni avastamiseks: 100% tundlikkuse ja 98% spetsiifilisusega on valepositiivsete ja valenegatiivsete tulemuste risk võrreldes histoloogia ja vere antikehade testimisega 2,3% madalam.

Analüüs põhineb suukaudselt manustatud vedela uurea hüdrolüüsil, mis on märgistatud süsinikuaatomiga (stabiilne mitteradioaktiivne isotoop) 13C-ga (50–75 mg 13C-uureat lahjendatud 100 ml vedelikus) H. pylori ureaasi poolt.

Isotoopindikaatoriga märgistatud karbamiid hüdrolüüsib maos, mille käigus vabaneb märgistatud aatomeid sisaldav ammoniaak ja süsinikdioksiid, mis difundeerub verre ja eritub hingamise ajal kopsudest. Märgistatud süsinikdioksiidi registreeritakse analüütilise seadmega - massispektromeetriga, mille töö põhineb mittedispersiivsel isotoopselektiivsel spektroskoopial, või infrapunaspektroskoopilise analüsaatoriga.

Kiire ureaasi test

Kiire ureaasi test (RUT) tehakse mao ja kaksteistsõrmiksoole endoskoopilise uuringu käigus – kasutades kaasaegseid endofibroskoope – ja samaaegselt biopsiaproovide võtmisega. Biomaterjal peaks olema võetud mao antrumosast. Seega on fibrogastroduodenoskoopia ehk FGDS koos ureaasi testiga invasiivne diagnostiline meetod.

Saadud biopsia kastetakse täielikult ettevalmistatud standardiseeritud keskkonda, mis sisaldab agar-geeli, uureat, happe-aluse indikaatorit fenoolsulfoftaleiini ja bakteriostaatilist ainet (lisatud saastavate mikroorganismide kasvu ja valepositiivsete tulemuste vältimiseks).

Kui maokoeproovis leidub H. pylori baktereid, hüdrolüüsib nende toodetav ureaas uureat ja tõstab pH-d, mis on selgelt nähtav, kui indikaator muutub kollasest oranžiks (pH 6,8 juures) ja lillaks (pH > 8 juures). 75% positiivsetest testidest muudab värvi 120–180 minuti jooksul ja mida kiiremini indikaator värvi muudab, seda suurem on bakterite arv. Kuid negatiivsena näivaid teste säilitatakse 24 tundi.

Kiire ureaasi test positiivne, mida see tähendab? Positiivne RUT-test – indikaator muutub punaseks – tähendab, et agarkeskkonda asetatud biopsiaproov sisaldab vähemalt 105 H. pylori bakterit, kuigi nende kontsentratsioon on tavaliselt suurem.

Erinevate testi modifikatsioonide tundlikkus varieerub vahemikus 90–98% ja spetsiifilisus 97–99%.

Nagu gastroenteroloogid on märkinud, kui patsiendi järeldus näitab järsult positiivset ureaasi testi (kolm risti), tähendab see: pH on > 8 ja indikaator on muutnud värvi vähem kui 60 minuti jooksul alates biopsia kastmise hetkest, mis näitab suurt hulka H.pylori ja kõrget ureaasi ekspressioonitaset. Bakterite ligikaudset arvu saab loendada biopsia histoloogilisel uurimisel mikroskoobi all ja kui see ületab visualiseeritud alal 40-50, peetakse infektsiooni taset kõrgeks.

13C uurea hingamistest annab harva valepositiivseid tulemusi ning mao- või kaksteistsõrmiksoole haavandi kahtlusega patsientidel loetakse diagnoosi kinnitavaks üks positiivne test, samas kui negatiivne tulemus tuleks kinnitada EGD-ga koos uurea testiga.