Immunoloogilised uuringud uroloogias

Immunoloogilise ravi määramine uroloogilisele patsiendile tähendab, et raviarst eeldab immuunsüsteemi häirete esinemist. Dubleeriks bakteriaalsete, viirus-, seeninfektsioonid, allergilised reaktsioonid, süsteemsed haigused võivad olla nende häirete sümptomite, mida iseloomustab mitmete sündroomid (infektsioon, vähk, allergiliste, autoimmuunsete, lümfoproliferatiivsest). Ühel patsiendil võib olla mitu sündroomi. Näiteks kroonilise nakkushaigused (nakkusliku sündroom) võivad põhjustada immuunpuudulikkusega ja immuunpuudulikkusega võib väljenduda eelsoodumus nakkushaigused ja vähk (sündroom). Infektsiooniprognoos võib toimuda teisese immuunpuudulikkuse taustal, mis on tekkinud lümfoproliferatiivse haiguse, näiteks leukeemia, tagajärjel. Immuunsüsteemis on kolm peamist patoloogiliste muutuste rühma:

• immuunsuse ühe või teise seose kvantitatiivne või funktsionaalne puudulikkus, mis põhjustab immuunpuudulikkuse tekkimist;
• rikkumine antigeeni tuvastamisel immuunsüsteemis, mis viib autoimmuunprotsesside arenguni;
• hüperreaktiivne või perverteeritud immuunvastus, mis avaldub allergiliste haiguste arengus.

On skriining (1. Taseme testid) ja immunodiagnostika kvalifitseerumiseks (kaheastmelise testi tulemused). Esimesed eksisteerivad, et määrata immuunsüsteemis esinevad rikkumised, viimane - kehtestada mehhanismid nende rakendamiseks täiendava immunokorrektsiooni eesmärgil.

Immuunsuse B-Cellular link

Sõelumismeetodid

• Määramine suhteline ja absoluutne arv B-lümfotsüüdid via immuunfluorestsents või tsütomeetriat monoklonaalsete antikehade abil B-raku antigeene (CD19, CD20, milles CD - rakupinna diferentseerumise). Täiskasvanutel on B-lümfotsüütide sisaldus normaalne: 8-19% leukotsüütide koguarvust või 190-380 rakku / μl. Kasvav sisu B lümfotsüüdid esineb ägedate ja krooniliste bakteriaalsete ja seeninfektsioonide, krooniline maksahaigus, süsteemne sidekoe haigused, krooniline lümfoidne leukeemia, hulgimüeloom.
• Kontsentratsiooni määramine immunoglobuliinide nespespetsificheskih (F, M, G, E) ühekordse radiaalse immunodifusiooni või turbometrii nefelomeetriaga radioimmunotesti või immunoensüümimeetod (EIA). Täiskasvanute normid: immunoglobuliin (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Immuunglobuliinide kontsentratsiooni suurenemine toimub samade patoloogiliste seisunditega, milles esineb B-lümfotsüütide sisalduse suurenemine. Kontsentratsiooni alandamine immunoglobuliinide on kaasasündinud hüpogammaglobulineemiaga, kasvajad immuunsüsteemi, põrna eemaldamist, valgu kadu, haigused, neeru- või soolte ravi tsütostaatiliste immunodepreesantami.

Meetodite täpsustamine

• Tsirkuleerivate immuunkomplekside määramine veres valikuliselt sadestades polüsileneglükoolis, millele järgneb spektrofotomeetrilise tiheduse määramine (tavaline 80-20 UE). Tsirkuleerivate immuunkomplekside tõus on iseloomulik ägeda bakteriaalse, seente, viirusnakkuste, autoimmuunse, immunokomplekssete haiguste, seerumihaiguse, 3. Tüübi allergiliste reaktsioonide suhtes;
• Määramine spetsiifilised immunoglobuliinid veres seoses bakter- ja viirushaiguste antigeene, desoksüribonukleiinhappe (DNA) autoimmuunhaiguste, identifitseerimise spermide (autoimmuunne viljatuse) ja protivopochechnyh antikehad (püelonefriit ja glomerulonefriit) radiaalse immunodifusiooni või ELISA.
• Sperma antisperm-antikehade määramine [MAR-test (segatud antiglobuliini reaktsioon)], norm on negatiivne.
• Immuunglobuliinide kontsentratsiooni määramine uriinis püelonefriidi ja glomerulonefriidi vahel (proteinuuria selektiivsus) diferentsiaaldiagnostikas.
• IgE sisalduse määramine eesnäärme mahlis allergilise prostatiidi diagnoosimiseks radiaalse immunodifusiooni või ELISA meetodil. 
• Research vastuseks blasttransformation reaktsiooni lümfotsüütide B B-rakuline mitogeen (kermeslille mitogccn stimuleerimine blasttransformation reaktsiooni B-lümfotsüüdi kohalolekul T-lümfotsüüdid), kusjuures standard väärtuse 95-100%.

Immuunsuse T-rakuline seos

Sõelumismeetodid

• Määramine suhteline ja absoluutne küpsete CD3 T lümfotsüüdi reaktsiooni immunofluorestsentanalüüs või vooluhulga tsütofluorimeetrias kasutades anti-SDZ monokloonseid antikehi. Täiskasvanutele mõeldud norm on 58-76% või 1100-1700 rakku / μl. T-lümfotsüütide arvu vähenemine näitab immuunsuse rakulise seose puudulikkust. See on iseloomulik mitme sekundaarse ja primaarse immuunpuudulikkusega (krooniline bakteriaalne ja viirusnakkused: tuberkuloos, omandatud immuunpuudulikkuse sündroom, vähk, krooniline neerupuudulikkus, trauma, stress, vananemine, alatoitlus, tsütotoksiliste ravimitega, ioniseeriv kiirgus). T-lümfotsüütide arv suureneb immuunsuse hüperaktiivsuse või lümfoproliferatiivsete haiguste taustal. Põletikuga suureneb kõigepealt T-lümfotsüütide arv ja seejärel väheneb. T-lümfotsüütide vähenemise puudumine näitab põletikulise protsessi kroonimist.
• Lümfotsüütide subpopulatsioonide hindamine.
  • T-aitajate arvu määramine (anti-CD4 antikeha). Tavaliselt 36-55% või 400-1100 rakku / μl. Nende rakkude arvu suurenemine esineb autoimmuunhaiguste korral, Waldenstromi haigus, antigrafti implantatsiooni aktiveerimine; arvu vähenemine T-abistaja rakud esineb krooniline bakteriaalne, viiruslik, algloomainfektsioonid, tuberkuloos, omandatud immuunpuudulikkuse sündroom, pahaloomulised kasvajad, põletuste, trauma, alatoitlus, vananemine, tsütostaatikumid ravi ioniseeriva kiirgusega.
  • T-supressorite arvu määramine (CD4-vastane antikeha). Tavaliselt 17-37% või 300-700 rakku / μl. T-suppressorite arvu kasv suureneb samadel tingimustel, kus T-abistajate arv väheneb ja nende vähenemine samadel tingimustel, kui T-aitajate sisu tõuseb.
  • Immuunreguleeriv indeks CD4 / CD8, norm 1,5-2,5. Hüperaktiivsus kiirusega üle 2,5 (allergilised ja autoimmuunhaigused); hüpoaktiivsus - alla 1,0 (krooniliste infektsioonide eelsoodumus). Põletikuprotsessi alguses tõuseb immunoregulatoorne indeks ja kui see kaotab, normaliseerub see.

Meetodite täpsustamine

• Naturaalsete tapjate (NK-rakkude) arvu määramine - CD16-vastased ja CD56-vastased antikehad. CD 16-lümfotsüütide normatiiviks on 6-26%, CD56-9-19%. Arvu suurendamine NK-rakud esineb transplantaadi hülgamise, vähendavad - viirusinfektsioonides, vähk, primaarse ja sekundaarse immuunpuudulikkus, põletuste, trauma ja stressi, töödeldes tsütostaatikumide ja ioniseerivat kiirgust. 
• T-lümfotsüütide arvu kindlaksmääramine interleukiin-2 retseptoriga (aktiveerimismarker) - anti-CD25 antikehad. See norm on 10-15%. Nende arvu suurenemist täheldatakse allergiliste haiguste, transplantaadi äratõukereaktsiooni, reageeringu proteiinidest sõltuvate antigeenide puhul esmase nakkuse akuutsel perioodil, nende haiguste vähenemisega, mille korral NK-rakkude arv väheneb.
• Aktiveerimismärgise ekspressiooni uurimine - II klassi HLA-DR histoloogiline kokkusobivusmolekul. Suurenenud ekspressioon tekib põletikulises protsessis, C-hepatiidi, tsöliaakia, süüfilise, ägedate hingamisteede infektsioonidega patsientidel.
• Lümfotsüütide apoptoosi hindamine. Märge valmisolekut lümfotsüüdi apoptoosi saab eristab nende ekspressiooni pinna Fas-retseptori (CD95) mitokondrites ja bd-2 protoonkogeeni. Hinnati apoptoosi lümfotsüüdi töötlemise kahe fluorestsentsvärvainetega: propiidiumjodiidil, mis seondub DNA fragmente ja anneksiinil Y, seondudes fosfatidüülseriin rakumembraanile ilmumist varase apoptoosi. Tulemuste hindamine viiakse läbi voolu tsüttofluorimeetril. Tulemuste arvutamine põhineb erinevat värvainetega värvitud rakkude suhtel. Unstained rakud on elusrakkude, seotud ainult anneksiinil Y, - apoptoosi varaste nähtude, propiidiumjodiidiga ja anneksiinil I - late ilminguid apoptoosi värvimisega ainult propiidiumjodiidil näitab nekroos.
• T-lümfotsüütide proliferatsiooni hindamine in vitro.
  • Raku blastogeneesi muutus on lümfotsüütide lööklainete transformatsioon. Leukotsüüte inkubeeritakse ükskõik millise taimse päritoluga mitogeeniga (lektiinid). Kõige sagedamini kasutatav fütohemaglutiniin 72 tunni jooksul, seejärel tehke määrdumine, plekid ja arvutage blastide arv! Stimulatsiooniindeks - suhe protsentides muundunud rakkude eksperimendis (kultuuri PHA) protsendis transformeeritud rakud kontrollgrupis (kultuuri ilma PHA). Lümfotsüütide lööklainete transformatsiooni reaktsiooni saab hinnata radioaktiivse märgise (ZN-tümdiini) lisamisega kultiveeritud rakkudele, kuna rakkude jagamisel suureneb DNA süntees. Proliferatiivse vastuse häired esinevad nii infektsioonide, onkoloogiliste haiguste, neerupuudulikkuse kui ka kirurgiliste sekkumistega seotud primaarsetel ja sekundaarsetel immuunpuudulikkustel.
  • Hindamine Nende uuringute ekspressiooni aktivatsioonimarkerite (CD25, Transferriiniretseptori to - CD71) molekulide ja MHC II klassi HLA-DR, mis on oluliselt puuduvate puhkavatel T-lümfotsüüdid. T-lümfotsüütide poolt stimuleeritud fütohemaglutiniiniga 3 päeva pärast ekspressiooni aktivatsioonimarkerite analüüsiti otsese või kaudse immunofluorestsentsi tsütomeetriat monoklonaalsete antikehade abil eritatud retseptoreid.
  • Koguse mõõtmist mediaatorite sünteesida aktiveeritud T-lümfotsüüdid [interleukiin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferooni jne], radioimmuunkatse või ELISA. Eriti oluline on y-interferooni ja IL-4 kontsentratsiooni hindamine TH ja Th2 markeritena aktiveeritud kultuuride supernatandis ja rakus. Kui võimalik, siis on kasulik, et määrata geeniekspressioon vastavat tsütokiini taseme messenger ribonukleiinhape treoniini tootva raku ja retseptori ekspressioon osatähtsust vastava tsütokiinide.
    
• Lümfotsüütide migratsiooni pärssimise reaktsioon. Sensibiliseeritud T-lümfotsüüdid reageerivad antigeeni vabastavate lümfokiinidega, sealhulgas teguritega. Lümfotsüütide migratsiooni pärssimine. Inhibeerimise fenomen on täheldatud, kui mitoogeenid viiakse rakkude kultuurisse. Haiguse taseme hindamine võimaldab hinnata lümfotsüütide võimet vabastada tsütokiine. Tavaliselt on rände sagedus sõltuvalt konkreetsest mitogeenist 20-80%.
• NK-rakkude tsütotoksilisuse hindamine. Määrake loomulike tapjarakkude võimekus hävitada erütromüeloidse liini K-562 sihtrakud. Kui hinnatakse antikeha-sõltuvat tsütotoksilisust, kasutatakse sihtrakke, mis on kaetud IgG antikehadega. Sihtrakud märgistatakse 3H-uriidiiniga ja inkubeeritakse efektorrakkudega. Sihtrakkude surm hinnatakse radioaktiivse märgise vabanemisest lahusesse. Tsütotoksilisuse vähenemine toimub pahaloomuliste kasvajatega. Mõnel juhul, kui interleukiinidega ravi efektiivsuse prognoos on vajalik, hinnatakse NK-rakkude tsütotoksilisust, kui need on inkubeeritud teatud tsütokiinidega.

Fagotsüütide funktsiooni uurimine

Sõelumismeetodid

Mikroobsete rakkude imendumise uurimine fagotsüütide poolt (lateksosakeste fagotsütoos, stafülokokkide katsekultuur, Escherichia coli või patsiendilt isoleeritud mikroorganismid). Tsentrifugaaljõu hepariniseeritud verest leukotsüüte läga lisati IV vereseerumis opsonisatsiooniks (opsoniinid - valgud, mis võimendavad fagotsütoosi). Mikroobne suspensioon lahjendatakse, segatakse leukotsüütidega ja inkubeeritakse 120 minutit, analüüsitakse proovide võtmist 30,90,120 min pärast inkubeerimise alustamist. Valitud leukotsüütide suspensioonidest tehakse määrdeid. Määrake järgmised fagotsütoosi näitajad:

• fagotsütiline indeks - fagotsütoosi sisenenud rakkude protsent 30 minuti ja 120-minutiliste inkubatsioonide käigus; fagotsüütilise indeksi normatiivne väärtus (30) 94% fagotsütilisest indeksist (120) - 92%;
• fagotsüütide arv - rakusiseseks muutunud bakterite keskmine arv; fagotsüütilise arvu normatiivväärtus (30) 11%, fagotsütiline number (120) - 9,8%;  
• fagotsüütide arvu koefitsient - fagotsüütide arvu (30) suhe fagotsütilisse arvusse (120); tavaline 1.16;
• neutrofiilide bakteritsiidsed indeksid on faagotsüütide sees surmatud mikroobide ja mikroobide koguarvu arvu suhe; norm 66%.

Meetodite täpsustamine

• Fagotsüütide bakteritsiidse aktiivsuse uurimine nitrosinetetrasooliumi (NST) testis on NST-katse. Leukotsüütidele lisatakse kollaseks dilämmastikoksiidi tetrasooliumi värv. Kui neutrofiil imendub värviga, toimub redutseerimisprotsess hapniku vabade radikaalide toimel, mille tulemuseks on sinine värvumine. Reaktsioon viiakse läbi 96 süvendiga lameda põhjaga plaadil. Esimeses kolmes süvendis HCT ja leukotsüütide segus lisatakse Hanksi lahus (spontaanne HCT), viimases - lateksiosakesed; inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C 25 minutit. Tulemused loetakse lugejat 540 nm juures ja väljendatakse tavapärastes ühikutes. Arvutage stimulatsiooni tegur (K _st ), mis on võrdne optilise tiheduse suhtega stimuleeritud kaevudes keskmise optilise tihedusega süvendites ilma stimulatsioonita. Tervetel inimestel on _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Kleepumismolekulide uurimine. Voolu tsütofluorimeetria abil määratakse pinnaantigeenide CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 ekspressioon. Immuunpuudulikkusega nakkumist rikkudes ilmnevad retsidiivsed infektsioonid, haavade aeglane paranemine ja infektsioonikohtade puudumine.

Täiendusüsteemi uurimine

Sõelumismeetodid

Komplemendi hemolüütilise aktiivsuse määramine - komplemendi aktiveerimise klassikalise raja uuring. Antikehadega kaetud lamba erütrotsüüdidesse lisatakse patsiendi ja terve inimese seerumi erinevad lahjendused. Hemolüütilise aktiivsuse ühik on seerumi lahjenduse pöördvõrdeline, kus 50% erütrotsüütidest on hävinud. Hemolüüsi taset hinnatakse fotomeetriliselt hemoglobiini saagisega lahuses. Komplemendi hemolüütilise aktiivsuse vähenemist täheldatakse süsteemse erütematoosluupuse ja neerukahjustusega ägeda glomerulonefriidi korral. Kombineeritud immuunpuudulikkus, myasthenia gravis, viirushepatiit, lümfoomid, suurenenud - obstruktiivse ikteruse, troidiit Hashimotoga. Reumaatiline, reumatoidartriit, nodulaarne periarteriit. Dermatomüosiit, müokardi infarkt, haavandiline koliit, Reiteri sündroom, podagra.

Meetodite täpsustamine

• Komplemendi komponentide kindlaksmääramine. Kvantitatiivne määramine toimub radiaalse immunodifusiooni ja nefelomeetrilise meetodi abil.
  Uuring ei ole informatiivne, välja arvatud juhul, kui komplemendi komponentide antigeensed omadused on muutunud.
• Leiti, et komplemendi Clq-komponent suurendab fagotsütoosi ja vahendab rakulist tsütotoksilisust. Selle langus esineb immuunkomplekside, süsteemse erütematoosluupuse, pankrease infektsioonide ja kasvajate haiguste puhul.
• C3-komponent osaleb klassikalise ja alternatiivse komplemendi raja aktiveerimisel. Selle kontsentratsiooni vähendamine on seotud krooniliste bakteri- ja seennakkuste, tsirkuleerivate või koeimmuunkomplekside esinemisega.
• C4 komponent osaleb klassikalise raja aktiveerimisel. Selle kontsentratsiooni vähendamine on seotud immuunkomplekside komplemendi pikendatud aktiveerimisega ja C1 inhibiitori kontsentratsiooni vähenemisega, mis kontrollib klassikalise komplementaarse raja aktiveerimist. C4 defitsiit esineb süsteemse erütematoosluupusega, C4 suurenemine esineb neeruhaiguse, transplantaadi äratõukereaktsiooni, akuutse põletiku ja seedetrakti haiguste puhul.
• C5a on C5 molekuli väike fragment, mis eraldatakse sellest komplemendi süsteemi aktiveerimise tulemusena. Selle kontsentratsiooni suurenemine toimub põletiku, sepsise, atoopiliste ja allergiliste haiguste korral.
• Cl-inhibiitor on multifunktsionaalne tegur. See kontrollib komplemendi C1 komponendi aktiveerimist, inhibeerib kallikreiini, plasmiini ja aktiveeritud faktori Hagemani, proteaaside Cl ja Ori aktiivsust. C1-inhibiitori defitsiit põhjustab angioödeemi.
• täiendavad uuringud. Tavalisele seerumile, millel puuduvad komplemendi komponendid, lisatakse uuritav seerum ja määratakse komplemendi hemolüütiline aktiivsus. Kui hemolüütilist aktiivsust ei taastata normaalseks, arvatakse, et selle komplemendi komponendi aktiivsus uuritavas seerumis väheneb.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]