Konfokaalne eluaegne sarvkesta mikroskoopia

Sarvkesta konfokaalne mikroskoopia on üks kaasaegseid uurimismeetodeid, mis võimaldab sarvkesta intravitaalset jälgimist koos kudede visualiseerimisega rakulisel ja mikrostruktuurilisel tasandil.

See meetod võimaldab mikroskoobi originaalse disaini ja selle kõrge lahutusvõime tõttu visualiseerida elusat sarvkesta kude, mõõta iga selle kihi paksust ja hinnata morfoloogiliste häirete astet.

Sarvkesta konfokaalse mikroskoopia eesmärk

Sarvkesta morfoloogiliste muutuste iseloomustamiseks, mis esinevad mitmesugustes põletikulistes ja düstroofsetes haigustes, samuti kirurgiliste sekkumiste ja CL-ga kokkupuute tagajärjel.

Morfoloogilise uuringu andmed on vajalikud patoloogilise protsessi raskusastme hindamiseks, ravi efektiivsuse hindamiseks ja patsiendi juhtimise taktika määramiseks.

Menetluse tähised

• Sarvkesta põletikulised haigused ( keratiit ).
• Sarvkesta düstroofsed haigused ( keratokonus, Fuchsi düstroofia jne).
• Kuiva silma sündroom.
• Sarvkesta kirurgiliste sekkumiste järgsed seisundid ( sarvkesta penetreeriv siirdamine, keratoreffraktsioonilised operatsioonid).
• Kontaktläätsede kandmisega seotud seisundid.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Ettevalmistus

Seda uuringut saab teha ilma anesteetikumideta. Konfokaalse mikroskoobi objektiivile kantakse tilk immersioonivedelikku. See välistab läätse otsese kokkupuute sarvkestaga ja minimeerib epiteeli kahjustamise ohtu.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Tehnika sarvkesta konfokaalne mikroskoopia

Uuring viiakse läbi ConfoScan 4 (Nider) konfokaalse mikroskoobi abil, mille suurendus on 500 korda. Seade võimaldab sarvkesta uurida kogu selle paksuses.

Uuritava ala suurus on 440 × 330 μm, skaneeriva kihi paksus on 5 μm. Geelitilgaga lääts viiakse sarvkestale kuni selle puudutamiseni ja paigaldatakse nii, et immersioonivedeliku kihi paksus oleks 2 mm. Seadme konstruktsioon võimaldab uurida sarvkesta kesktsoonis ja selle paratsentraalsetes piirkondades.

Protseduuri vastunäidustused

Suhteline vastunäidustus on tugev silmade ärritus ägeda põletikulise protsessi tõttu.

[ 10 ], [ 11 ]

Tavaline jõudlus

Sarvkesta normaalne morfoloogiline pilt

Eesmine epiteel koosneb 5-6 rakkude kihist. Kogu epiteeli keskmine paksus on umbes 50 µm. Morfoloogilise struktuuri järgi eristatakse järgmisi kihte (seestpoolt väljapoole): basaal-, nõelakujulised ja pindmised kihid.

• Kõige sisemist (basaal) kihti esindavad väikesed, tihedad, silindrilised rakud, millel puudub nähtav tuum. Basaalrakkude piirid on selged ja heledad.
• Keskmine kiht koosneb 2-3 kihist okastest (tiivulistest) rakkudest, millel on sügavad invaginatsioonid, millesse on kinnistunud naaberrakkude väljakasvud. Mikroskoopiliselt on rakkude piirid üsna selgelt eristatavad ning tuumad ei pruugi olla määratletud või võivad olla ebaselged.
• Epiteeli pindmist kihti esindab üks või kaks selgepiiriliste ja homogeense tihedusega hulknurksete rakkude kihti. Tuumad on tavaliselt tsütoplasmast heledamad, milles on eristatav ka perinukleaarne tume rõngas.

Pindmise kihi rakkude hulgast eristuvad tumedad ja heledad rakud. Epiteelirakkude suurenenud peegelduvus näitab nende ainevahetuse kiiruse vähenemist ja algavat ketendust.

Bowmani membraan on läbipaistev struktuur, mis ei peegelda valgust, seega on seda tavaliselt võimatu konfokaalse mikroskoopiaga visualiseerida.

Subbasaalne närvipõimik asub Bowmani membraani all. Tavaliselt ilmuvad närvikiud tumedal taustal paralleelselt kulgevate heledate triipudena, mis puutuvad kokku üksteisega. Peegelduvus (heledustekivus) võib kiu ulatuses olla ebaühtlane.

Sarvkesta stroom hõlmab 80–90% sarvkesta paksusest ning koosneb rakulistest ja rakuvälistest komponentidest. Strooma peamised rakulised elemendid on keratotsüüdid; need moodustavad umbes 5% sarvkesta mahust.

Strooma tüüpiline mikroskoopiline pilt hõlmab mitmeid eredaid ebakorrapäraseid ovaalse kujuga kehasid (keratotsüütide tuumad), mis asuvad läbipaistva tumehalli või musta maatriksi paksuses. Tavaliselt on rakuväliste struktuuride visualiseerimine nende läbipaistvuse tõttu võimatu. Strooma võib tinglikult jagada alamkihtideks: eesmised (asuvad otse Bowmani membraani all ja moodustavad 10% strooma paksusest), eesmised-keskmised, keskmised ja tagumised.

Keratotsüütide keskmine tihedus on eesmises stroomas suurem, vähenedes järk-järgult tagumiste kihtide suunas. Eesmiste stroomarakkude tihedus on peaaegu kaks korda suurem kui tagumiste stroomarakkude tihedus (kui eesmiste stroomarakkude tiheduseks võtta 100%, siis tagumiste stroomarakkude tihedus on umbes 53,7%). Eesmises stroomas on keratotsüütide tuumad ümara oakujulised, tagumises stroomas aga ovaalsed ja piklikumad.

Keratotsüütide tuumade heledus võib varieeruda. Erinev valguse peegeldamise võime sõltub nende ainevahetusseisundist. Heledamaid rakke peetakse aktiveeritud keratotsüütideks ("stressirakkudeks"), mille aktiivsus on suunatud sarvkesta sisemise homöostaasi säilitamisele. Normis ja nägemisväljas leidub üksikuid aktiveeritud rakke.

Sarvkesta eesmise strooma närvikiud visualiseeritakse eredate homogeensete ribadena, moodustades sageli bifurkatsioone.

Descemeti membraan on tavaliselt läbipaistev ja seda ei visualiseerita konfokaalse mikroskoopiaga.

Tagumine epiteel on kuusnurksete või hulknurksete lamedate rakkude monokiht, millel on ühtlaselt hele pind selgete tumedate rakkudevaheliste piiride taustal.

Seadmel on võimalus käsitsi või automaatselt arvutada rakkude tihedust, nende pindala ja varieeruvuskoefitsienti.

Sarvkesta struktuuri patoloogilised muutused

Keratokonust iseloomustavad sarvkesta eesmise epiteeli ja strooma olulised muutused.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]