Sarvkesta seinakontsentraalne intravitaalne mikroskoopia

Sarvkesta konfokaalmikroskoopia on üks tänapäevaseid uurimismeetodeid; võimaldab läbi viia sarvkesta seisundi intravitaalset jälgimist koos kudede visualiseerimisega rakulisel ja mikrostruktuurilisel tasandil.

Selle meetodi tõttu on mikroskoobi originaalse disaini ja selle kõrge eraldusvõime tõttu võimalik visualiseerida sarvkesta elusaid kudesid , mõõta nende kihtide paksust ja hinnata morfoloogiliste häirete taset.

Sarvkesta konfokaalmikroskoopia eesmärk

Kirjeldage sarvkesta morfoloogilisi muutusi, mis tulenevad mitmesugustest põletikulistest ja düstroofsetest haigustest, samuti kirurgilisest sekkumisest ja CR-i mõjudest.

Morfoloogilised andmed on vajalikud, et hinnata patoloogilise protsessi tõsidust, ravi efektiivsust ja määrata patsiendi juhtimise taktikat.

Menetluse tähised

• Sarvkesta põletikulised haigused ( keratiit ).
• Sarvkesta düstrofilised haigused ( keratokonus, Fuchsi düstroofia jne).
• "Kuiva silma" sündroom.
• Tingimused pärast sarvkesta kirurgilist sekkumist ( sarvkesta siirdamine, keratorefraktiivsed toimed).
• Kontaktläätsede kandmisega seotud tingimused .

[1], [2], [3], [4]

Ettevalmistus

See uuring on võimalik ilma anesteetikumide kasutamata. Konfocal-mikroskoobi objektiivi läätsele asetatakse tilk keetmise vedelikku. See välistab läätse otsese kokkupuute sarvkestaga ja vähendab epiteeli kahjustuse ohtu.

[5], [6], [7], [8], [9],

Tehnika sarvkesta confocal mikroskoopia

Uuring viiakse läbi konsoolmikroskoobiga ConsoScan 4 (Nider), suurendades seda 500 korda. Seade võimaldab teil uurida sarvkesta kogu paksuse ulatuses.

Uuritava ala suurus on 440 × 330 μm, skaneeriva kihi paksus on 5 μm. Sarvkestaga läätseks lüüakse geeli tilk, et seda puudutada ja seatud nii, et keetmise vedeliku kihi paksus on 2 mm. Seadme disain võimaldab teil uurida sarvkesta keskosas ja selle paratsüklilistes piirkondades.

Protseduuri vastunäidustused

Suhteline vastunäidustus silma ärritus ägeda põletikulise protsessi taustal.

[10], [11]

Tavaline jõudlus

Sarvkesta normaalne morfoloogiline pilt

Esiosa epiteel koosneb 5-6 kihti rakkudest. Kogu epiteeli keskmine paksus on umbes 50 μm. Vastavalt morfoloogilisele struktuurile eristatakse järgmisi kihte (väljastpoolt): basaal-, subordinaat ja pindmine.

• Sügavaima (basaal) kihi esindavad väikesed tihedad silindrilised rakud, millel puudub nähtav tuum. Basaalrakkude piirid on selged, säravad.
• Keskmine kiht koosneb 2-3 kihist lülisamba (tiivustatud) rakkudest, millel on sügavad invaginatsioonid, mille sisse on ehitatud naaberrakkude väljakasv. Mikroskoopiliselt on raku piirid üsna hästi eristatavad ja tuumad ei pruugi olla määratletud või fuzzy.
• Epiteeli pinnakihi on esindatud ühe või kahe kihiga hulknurksetest rakkudest, millel on selged piirid ja ühtlane tihedus. Tuumad on tavaliselt tsütoplasmas heledamad, milles võib eristada ka peaaegu tuuma tumedat ringi.

Pinnakihi rakkude hulgas eristatakse pimedat ja valgust. Epiteelirakkude suurenenud peegelduvus näitab ainevahetuse taseme langust nendes ja nende desquamatsiooni algust.

Bowmani membraan on läbipaistev struktuur, mis ei kajasta valgust, seega on seda võimatu visualiseerida, kui tehakse konfokaalmikroskoopiat.

Alambaarne närvipõhi asub Bowmani membraani all. Tavaliselt näevad närvikiud välja helged ribad, mis töötavad paralleelselt tumedal taustal, teineteisega kokku puutudes. Reflektiivsus (peegelduvus) võib kiudude pikkuses olla ebaühtlane.

Sarvkesta stroma moodustab sarvkesta paksusest 80-90% ja koosneb rakulistest ja rakuvälisest komponendist. Stroomi põhilised rakulised elemendid on keratotsüüdid; moodustavad umbes 5% mahust.

Stroma tüüpiline mikroskoopiline struktuur sisaldab mitut erevärvilist ebakorrapärast ovaalset vormi (keratotsüütide tuum), mis asuvad läbipaistva tumehalli või mustas maatriksi paksuses. Tavaliselt ei ole rakuväliste struktuuride visualiseerimine nende läbipaistvuse tõttu võimatu. Stroom võib tingimustega jagada alamkihtidena: eesmine (asub otse Bowmani membraani all ja moodustab 10% stroma paksusest), eesmine, keskmine ja tagumine.

Keratotsüütide keskmine tihedus on eesmises stroomes kõrgem, järk-järgult väheneb nende arv tagumiste kihtide suunas. Anterior stroomarakust tihedus peaaegu kaks korda kõrgem kui tagumine stroomarakke (kui rakkude tihedus eesmise stroomas loetakse 100%, siis tihedus tagumise ümber 53,7% rakkudest). Esiosa stroomas on keratotsüütide tuumad ümmargune beanikujuline kuju, tagaosa ovaalne ja piklik.

Keratotsüütide tuum võib eredust erineda. Erinevus valguse peegeldamiseks oleneb nende metaboolsest seisundist. Heledamad rakud loetakse aktiveeritud keratotsüütideks (stress-rakud), mille tegevus on suunatud sarvkesta homöostaasi säilitamisele. Normis ja vaateväljas on olemas üksikud aktiveeritud rakud.

Sarvkesta eesmise stroomi närvikiud on visualiseeritud kui eredad homogeensed ribad, mis sageli moodustavad bifurkatsioonid.

Descemeti membraan on tavaliselt läbipaistev ja seda ei visualiseerita konfokaalmikroskoopia abil.

Tagumine epiteel on ühekihiline kuusnurkse või hulknurkse lamedate rakkude ühtlane kerge pind taustal, millel on erinevad tumedad rakkudevahelised piirid.

Seade pakub võimalust käsitsi või automaatselt arvutada raku tihedust, nende pindala ja varieeruvuse koefitsient.

Patheoloogilised muutused sarvkesta struktuuris

Keratokooni iseloomustavad märkimisväärsed muutused eesmise epiteeli ja sarvkesta stromas.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]